sbhl对hela细胞生长抑制作用的影响

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1、SBHL对HeLa细胞生长抑制作用的影响【关键词】端粒酶　　【Abstract】AIM:ToobservetheinhibitingeffectsofSBHLonthegroechanisms.METHODS:TheproliferationofHeLacellsetry.TheexpressionsofhTRTgenemunohistochemistrytechniquesandthedifferentiationofHeLacellssastaining.RESULTS:TheproliferationofHeLacellsg/LSBHL.Theinhibitingeffec

2、tincreasedgraduallyfolloentbySBHL,theexpressionsofhTRTgeneofHeLacellsdecreasedobviously.DifferentiatedHeLacellsentbySBHL.CONCLUSION:①Thegroeraseactivityisinhibitedandthegroerase;floetry;cellcycle;celldifferentiation　　【摘要】目的：观察SBHL对HeLa细胞生长的抑制作用，并探讨其作用机制.方法：用MTT比色法观察不同浓度SBHL对HeLa细胞增殖的影响；用流式细胞术

3、对细胞周期进行分析；用免疫组化方法观察SBHL对HeLa细胞人端粒酶逆转录酶(humantelomerasereversetranscriptase,hTRT)基因表达的影响.用瑞氏姬姆萨染色法观察SBHL对HeLa细胞形态的影响.结果：0.1~20.0mg/LSBHL对HeLa细胞增殖有明显的抑制作用，这种抑制作用随SBHL浓度的增加而增加；流式细胞术对细胞周期进行分析的结果显示，随着SBHL浓度的增加，S期细胞含量逐渐降低，G1期细胞含量逐渐增加，SBHL将细胞阻滞于G1期，抑制DNA合成.SBHL处理的HeLa细胞与对照组相比，hTRT基因的表达明显降低；瑞氏姬姆萨染色结果

4、表明SBHL可使HeLa细胞向良性分化.结论：SBHL明显抑制HeLa细胞生长呈浓度依赖性.SBHL下调HeLa细胞hTRT基因的表达，抑制端粒酶活性.　　【关键词】SBHL；HeLa细胞；端粒酶；流式细胞术；细胞周期；细胞分化　　0引言　　龙葵为茄科茄属植物，全草入药.龙葵具有清热解毒、化痰止咳等作用.药理实验表明有抗菌、消炎、抗肿瘤等作用［1］.SBHL是从龙葵浓缩果汁中提取出的一种游离的生物碱盐酸盐，在此盐分子上增加活性基团，保持其原有生物学活性基础上，使其产生新的高效活性.Putalun等［2］对龙葵的成分、分离方法、抗凝血及抗肿瘤作用进行了研究.龙葵总生物碱或其中成分有

5、抑制肿瘤作用，而由龙葵总生物碱转化而成的有效成分SBHL，其抗肿瘤活性及抗肿瘤作用机制无报道.我们观察了不同浓度SBHL对HeLa细胞生长的抑制作用，并探讨了SBHL对HeLa细胞生长抑制作用的机制.　　1材料和方法　　1.1材料　　HeLa细胞由长春肿瘤研究所提供;SBHL由北华大学医学院刘良教授提供，用二蒸水配置成贮液.用RPMI1640培养液配制成终浓度为0.01,0.1,1.0,10.0和20.0mg/L.RPMI1640,胰蛋白酶和胎牛血清为Gibco公司产品；MTT,PI和DMSO均为Sigma公司产品.DAB显色试剂盒和通用型SP试剂盒和人端粒酶逆转录酶(human

6、telomerasereversetranscriptase,hTRT)检测试剂盒均购自北京中山生物技术有限公司.　　1.2方法　　用胰酶消化处于对数生长期细胞，接种于96孔培养板中，以不同浓度梯度SBHL作用于HeLa细胞，每个浓度3个孔，同时设不加SBHL对照孔，培养液空白孔，对照孔各3孔.培养5d，每日取1板，加入MTT(1g/L)，继续培养4h后，移去上清并用吸水纸吸干培养液，再加入DMSO，振荡至结晶完全溶解后，用酶标仪测定A490nm.将处于对数生长期的HeLa细胞加入25mL培养瓶中，当80%～90%细胞汇合时，加SBHL作用72h，用胰酶消化收集细胞，PBS洗2次

7、，4℃固定24h后，加入RNase，37℃水浴消化1h，再加入PI，避光4℃染色30min200目网筛滤过，上流式细胞仪检测HeLa细胞周期变化.将1.0mg/LSBHL加入对数生长期细胞培养72h,消化成单个细胞，将其涂在玻片上，加丙酮固定.按试剂盒说明进行操作.用SP免疫组化法分别检测HeLa细胞hTRT基因的表达，图片置于摄像显微镜下，选取观察部位.随机选取3~5个视野，在图像分析仪下测定灰度值，灰度值用Y=0.299R+0.587G+0.114B计算.收集对数生长期细胞，