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《叶酸偶联5氟尿嘧啶白蛋白对肿瘤细胞的毒性及靶向性研究》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在应用文档-天天文库。
1、叶酸偶联5氟尿嘧啶白蛋白对肿瘤细胞的毒性及靶向性研究作者:张武雄,凌丽,何练芹,臧林泉,潘雪刁,朱亮【摘要】目的研究叶酸偶联5氟尿嘧啶白蛋白在体外对肿瘤细胞的毒性及经叶酸受体介导的靶向性。方法选用叶酸受体表达阳性FR(+)宫颈癌HeLa细胞及叶酸受体表达阴性FR(-)肺癌A549细胞进行实验。用MTT法观察叶酸偶联物对细胞的毒性作用,同时利用游离叶酸能与叶酸偶联物竞争性结合叶酸受体的原理,考察叶酸偶联物是否具有经叶酸受体介导的靶向性。结果叶酸偶联物对FR(+)HeLa细胞具有比5氟尿嘧啶原料药更高的抑制率,能有效的靶向FR(+)He
2、La细胞,且细胞毒性作用能被过量的外源性游离叶酸所抑制,而叶酸偶联物对FR(-)A549细胞作用很弱。结论叶酸偶联的5氟尿嘧啶白蛋白能经叶酸受体介导靶向于叶酸受体丰富的肿瘤细胞。【关键词】叶酸偶联;5氟尿嘧啶;细胞毒性;靶向性 Abstract:ObjectiveTostudythecytotoxicityandtargetingabilityoffolateconjugated5fluorouracilalbuminviafolatereceptormediatedendocytosisontumorcellsinvitro
3、.MethodsThefolatereceptorpositiveFR(+)HeLacellandFR()lungA549cellent.ThecytotoxicityofthefolateconjugateontumorcellseasuredbyMTTassay.Accordingtothepetitiveinhibitionprincipleandduetothatfreefolatehadhighaffinityforfolatereceptor,freefolicacidediatedendocytosis.ResultsThe
4、cytotoxicityoffolateconjugatetoFR(+)HeLacelleconcentration,andcouldbeinhibitedbyexcessfreefolicacid,incouldbetargetedintotumorcellsediatedendocytosissignificantly. KeyoForma371);SZ93自动双重纯水蒸馏器(上海雅荣生化设备仪器有限公司)。 1.2实验材料 宫颈癌HeLa细胞、肺癌A549细胞(本院药理教研室保存);MTT(ThiazolylBlue噻唑兰,S
5、igma分装,北京鼎国生物技术有限责任公司);RPMI1640培养液(吉诺生物医药技术有限公司);RPMIMedium1640无叶酸培养基(CIBCO);特级胎牛血清(天津市濒洋生物制品科技责任有限公司);胰酶(Sigma,北京利科恒达科贸有限公司);96孔培养板(加拿大JETBiochemicalsIntl.,Inc);叶酸(企业标准,上海新量化工试剂有限公司);5氟尿嘧啶(5FU,南通精华制药有限公司);5氟尿嘧啶白蛋白(5FUB,实验室自制);叶酸偶联的5氟尿嘧啶白蛋白(5FUBF,实验室自制),其余试剂均为分析纯
6、。 2方法与结果 2.1药物在体外的细胞毒性[10,11] 实验分5组:空白对照组(不加细胞)、阴性对照组(加细胞,不加药)、5氟尿嘧啶组(5FU,阳性对照组)、5氟尿嘧啶白蛋白组(5FUB,不接叶酸)、叶酸偶联的5氟尿嘧啶白蛋白组(5FUBF,接有叶酸),用含10%(φ)胎牛血清RPMI1640培养液培养细胞,取处于对数生长期、生长状态良好的细胞,用0.25%胰蛋白酶消化单层培养细胞,离心使细胞沉淀,用PBS洗涤,用含10%(φ)胎牛血清无叶酸RPMI1640培养液配成单个细胞悬液,细胞密度为105个/mL以每孔1
7、04个细胞接种于96孔培养板中,每孔100μL。将培养板移入培养箱中,在37℃、5%CO2及饱和湿度条件下分别培养24h后更换100μL无叶酸RPMI1640培养液,并分别加入5FU,5FUB,5FUBF药液各100μL,使终质量浓度分别为2μg/mL,10μg/mL,50μg/mL的(偶联物均折算成5Fu的等价浓度),再培养36h后,每孔更换为100μL无血清无叶酸RPMI1640培养基的培养基,加入20μLMTT溶液(5mg/mL),在微量振荡器上振荡3min,继续培养4h,弃培养液,孔加入150μLDMSO,酶联免疫检测仪
8、测定490nm吸光度(A)。每种药物浓度设6个复孔。根据抑制率=(1-A药物/A对照)×100%计算抑制率,并以抑制率对药物浓度作图,结果见图1。从图1A中可看出,