微囊化胰岛细胞移植治疗糖尿病的实验研究

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1、微囊化胰岛细胞移植治疗糖尿病的实验研究【摘要】目的观察微囊化大鼠胰岛细胞移植治疗糖尿病小鼠的疗效。方法将糖尿病小鼠随机分为三组：生理盐水注入组、未囊化胰岛细胞移植组和微囊化胰岛细胞移植组。将生理盐水、纯化大鼠胰岛细胞和囊化大鼠胰岛细胞分别移植于三组糖尿病小鼠腹腔。结果分离的胰岛细胞对刺激反应良好，微囊化和未囊化胰岛细胞移植后均可纠正糖尿病小鼠的高血糖状态，但微囊化胰岛细胞移植组可维持正常血糖水平更长时间。结论微囊化胰岛细胞移植治疗糖尿病小鼠具有良好的效果，微囊具有较好的免疫隔离作用。【关键词】微囊；胰岛细胞移植；糖尿病Abstract:ObjectiveToobserv

2、etheeffectoftreatingdiabeticmiceicrocapsulatedratisletcelltransplantation.MethodsDiabeticmicelydividedinto3groups:controlgroup，nomicroencapsulatedisletcellstransplantationgroupandmicroencapsulatedisletcellstransplantationgroup.Normalsaline,paredratisletcellsandmicrocapsulatedisletcellsi

3、nalcavityofthreegroupsofdiabeticmice.ResultsTheisolatedisletcellshadagoodreactionforglucosestimulation.Boththemicrocapsulatedisletcelltransplantationandnonmicrocapsulatedisletcelltransplantationcouldbedecreasedthehighbloodglucoselevel，andtheformeronekeptlonger.ConclusionItisbelievedthat

4、microcapsulatedisletcelltransplantationexertsgoodeffectondiabeticmiceandthemicrocapsuleshavegoodimmunoisolatingfunction.Keyicrocapsulation;isletcelltransplantation;diabetes胰岛移植不仅可以纠正糖尿病的高血糖状态，而且可以防止或延迟糖尿病并发症的发生和发展。异种胰岛远比人源胰岛来源丰富，但是严重的免疫排斥反应限制了异种移植。应用生物材料制作的海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠(APA)微胶囊，其半通透性的

5、囊膜将细胞包裹，只允许小分子的营养物和细胞分泌物自由通过，限制大分子的免疫成分和细胞进入，从而达到延长移植物存活的免疫隔离作用［12］。本实验将微囊化、未囊化的大鼠胰岛细胞分别异种移植到糖尿病模型小鼠体，以观察两种移植控制糖尿病小鼠血糖的效果。1材料与方法1.1材料采用SD大鼠(180～220g)、昆明小鼠(20～25g)，雌雄不拘，由郑州大学实验动物中心提供。多聚赖氨酸、海藻酸钠、Histopaque1077、胶原酶、链脲霉素均为Sigma公司产品。RPMI1640为Gibco公司产品。胰岛素测定放免试剂盒为天津德普公司生产。京都2型血糖仪。1.2动物模型制作小鼠

6、腹腔注射链脲霉素(160mg/kg)制作糖尿病小鼠模型，血糖连续2次高于16.5mmol/L者定为糖尿病鼠。将糖尿病小鼠随机分为如下3组(每组5只)进行观察：①生理盐水注入组；②未囊化胰岛细胞移植组；③微囊化胰岛细胞移植组。1.3胰岛分离与纯化SD大鼠腹腔内注射10%水合氯醛(500mg/kg)麻醉，经胆总管插管注入胶原酶溶液(1mg/mL)至胰腺完全充盈，迅速摘取胰腺置37℃水浴消化20～25min，加入4℃MHBSS缓冲液终止消化，震荡数次。180×g离心2min，过300～400目滤网，将400目滤网反冲收集网上物，180×g离心2min，连续2次，吸净上清液。向

7、所得胰腺组织每管加入10mLHistopaque1077分离液，震荡使胰腺组织与分离液混匀，再缓慢加入等体积的RPMI1640培养液，4℃900×g离心20min，收集界面处的胰岛细胞，用MHBSS缓冲液洗涤3次。1.4胰岛刺激试验倒置显微镜下挑选100～300μm的胰岛细胞置24孔板中，30个/孔。分别加入含2.75mmol/L，16.5mmol/L葡萄糖及16.5mmol/L葡萄糖加0.5mmol/L茶碱的RPMI1640培养液，37℃培养24h后取上清液，用胰岛素放免试剂盒测定胰岛素分泌量。1.5统计学处理所有数椐均以±s表示，采