体外扩增高纯度的人外周血来源的nk细胞的研究

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1、体外扩增高纯度的人外周血来源的NK细胞的研究作者：李晓红　马健　汪菲菲　窦立萍　李猛　高春记【摘要】　　本研究探讨从人外周血中分选及扩增高纯度NK细胞的优化技术。先用miniMACS及阴性免疫磁珠分选方法，从外周血单个核细胞（PBMNC）得到纯化的NK细胞，随后在干细胞培液基条件下，通过IL2、IL12和IL15等细胞因子的不同组合将培养体系分为IL2组、IL2+IL12组、IL2+IL15组、IL2+IL15+IL12组和对照组（不加任何细胞因子），分别培养15天，每3天半量换液并补充细胞因子；检测分选及扩增前后（CD3-

2、CD56+）NK细胞含量、扩增倍数及扩增前后各组在不同效靶比下的杀伤率。结果显示经：miniMACS阴性免疫磁珠分选后（CD3-CD56+）NK细胞含量由分选前的11.19±5.25%提高到94.23±3.50%。培养15天后除对照组（CD3-CD56+）NK细胞纯度略下降外，其余4组与扩增前无显著性差异（P＞0.05）。在IL2、IL2+IL12、IL2+IL15、IL2+IL15+IL12培养体系中，NK细胞扩增倍数分别为15.43±1.08，19.87±3.87，50.46±4.31和52.35±6.72，均显著高于对照组6

3、.14±1.0（P＜0.01），但IL2+IL15与IL2+IL15+IL12组间未见显著差异（P＞0.05）。各组扩增的NK细胞对K562细胞的杀伤率均较扩增前增强，在不同效靶比下IL2+IL15、IL2+IL15+IL12组对K562细胞的杀伤率显著高于其他组，但两组间无显著性差异（P＞0.05）。结论：经miniMACS免疫磁珠阴性分选得少量NK细胞后，应用IL2+IL15培养条件是获得高纯度NK细胞的简单有效方法。【关键词】NK细胞；miniMACS；白介素2；白介素12；白介素15　　ExVivoExpansionofHi

4、ghlyPurifiedNKCellsfromHumanPeripheralBloodAbstractAdoptiveimmunotherapyusingallogenEicnaturalkiller(NK)cellsprovidestobeusefulinrecipientsafterallogenEIchematopoieticstemcelltransplantation(AlloHSCT),butitsapplicationhasbeenlimitedbytheinabilitytoobtainsufficientnumb

5、ersofpureNKcells.ThisstudyedtooptimizetheexpansionofhighpurityNKcellsfromhumanperipheralblood.First,theNKcellsPBMNCbyusingminiMACS(magiccellselection)andNKCellIsolationKitⅡ.ThentheisolatedcellslineHematopoieticStemCellExpansionMedium,Sigma)supplementedanABserumanddiff

6、erentbinationsofIL2and/orIL12,IL15for15days.Culturesediaandcytokinesevery3days,anduchhigherthanothers（P＜0.01),butnosignificantdifferencebetselves(P＞0.05).AndthepurityofCD3-CD56+NKcellsselves(P＞0.05).ItisconcludedthathighpurityofNKcellscanbeefficientlyexpandedincultu

7、reiniMACS;IL2,IL12,IL1NK细胞作为机体固有免疫的重要组成部分是机体抗肿瘤、抗感染的第一道天然防线。随着对NK细胞生物功能及活化机制的了解，NK细胞在造血干细胞/骨髓移植的辅助治疗及肿瘤过继免疫治疗方面的作用倍受关注。最近在异基因造血干细胞移植中发现供者异源反应性NK细胞可以发挥移植物抗白血病(graftversusleukemia，GVL)效应，并减少移植物抗宿主病(graftversushostdisease，GVHD)的发生［1-3］，故输注供者异源反应性NK细胞已经成为临床移植辅助治疗的新策

8、略［4,5］。然而，外周血中NK细胞含量少（约占淋巴细胞的5%-7%），且目前尚缺乏有效的体外扩增体系，所以NK细胞的广泛临床应用受到了限制。目前的许多体外研究均显示IL2、IL12、IL15对促进NK细胞的分化成熟、活化、增殖