细胞因子联合高效扩增高纯度人外周血来源NK细胞并观察其细胞功能的变化

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1、万方数据生堡垒邃堂盘查!Q塑生!旦筮!Q鲞筮!塑垦!也』丛!堂塑!：血塑!Q塑：!!!：!!：坠：鱼细胞因子联合高效扩增高纯度人外周血来源NK细胞并观察其细胞功能的变化李晓红马健吴晓雄汪菲菲李猛达万明于力高春记【摘要】目的探索从人外周血中分选及扩增高纯度NK细胞的方法，并初步了解扩增后的NK细胞功能的变化。方法采用免疫磁珠分选系统(miniMAcs)阴性分选法，从外周血单个核细胞(PBMNC)中获得纯化的NK细胞，在干细胞培养慕条件下，通过IL一2、IL—12和IL-15等细胞凶子的不同组合，分别培养15d，每3d半量换液并

2、补允细胞凶子；检测分选及扩增前后NK细胞cD3一CI)56+细胞含量、扩增倍数及扩增前后各组NK细胞穿孔素、颗粒酶BmRNA的表达水平及IFN一^y的分泌水平。结果经minjMAcs阴性免疫磁珠分选后CD3一CD56+细胞含量由分选前的(11．2±5．2)％提高到(94．2±3．5)％。培养15d后除对照组CD3一CD56+细胞纯度略下降外，j￡余组与扩增前无明显差异(P>O．05)。在IL-2、IL．2+IL．12、IL-2+IL—15、IL-2+IL-15+II。．12培养体系中，NK细胞扩增倍数分别为15．4±1．1，

3、19．9士3．9，50．5±4．3和52．4士6．7，均显著高于对照组(6．1士1．0)(P<0．01)，但IL．2+IL—15与IL-2+IL-15+IL．12组问比较，差异无统计学意义(P>0．05)。各组培养的NK细胞穿孔素、颗粒酶B基凶的表达量均较扩增前明显增加(P<0．01)，IL-2+IL—15组、IL-2+IL—12+IL-15组两种基因的表达量均显著高于其他组(Jpo．05)；各细胞因子组培养液中IFN—Y分泌水平均甚著高于未加细胞因子的空白对照组(P<0．

4、01)，IFN一1分泌水平IL．2十IL．12+IL一15组>IL-2+IL—12组>IL．2十IL．15组>IL—2组(尸<0．01)。结论经miniMACS免疫磁珠阴性分选法获得少量NK细胞后，应用IL一2+IL—15细胞凶子联合培养是获得纯度高、细胞毒活性强、扩增效率高的NK细胞的简单有效方法。【关键词】杀伤细胞；白细胞介素2；白细胞介素12；白细胞介素15；干扰素-1；细胞扩增StudyonexViVoexpa哪ionofhighlypuri行edNK∞llsfhmhumanperiphe嘲bIoodandchang

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