动员人外周血巨核祖细胞体外扩增的研究

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1、动员人外周血巨核祖细胞体外扩增的研究作者：夏婷，方建培，吴燕峰，徐宏贵，魏菁【摘要】 本研究探讨多种细胞因子组合的几种培养体系涅对人外周血CD34+细胞体外诱导扩增ｕ生成巨核细胞的作用，研究人外周血来源唱的巨核细胞体外扩增的最佳细胞因子组合惴及培养时间。用Ficoll-Hapa烂que分离法分离动员的外周血单个核细ㄝ胞，免疫磁珠法分离纯化CD34+细胞怜，并将其在含胎牛血清的液体培养体系中、各组细胞因子诱导下培养15天。在不毯同时间点采用血细胞计数板进行细胞计数│，采用流式细胞术检测培养体系中CD4挑1+细胞的含

2、量；同时采用甲基纤维素半边固体培养法进行巨核细胞集落培养，测定∩巨核细胞集落形成单位的数量。结果表明驭：经过15天的培养，在MPB来源的C烊D34+细胞体外诱导并扩增巨核祖细胞其体系中，以TPO/FL/IL-6/I饕L-3组合的扩增效果最好，明显高于其它3组，CD41+细胞第5天、10天源分别扩增了±倍、±倍。第15天CD4坭1+细胞含量及CD41+细胞数迅速下肤降。CFU-MK产率第5天、10天分迫别为±个、±个，明显高于其余3组。结啭论：以TPO/FL/IL-6/IL-抚3因子组合为体外诱导扩增巨核祖细胞的指

3、最佳组合，动员外周血的巨核祖细胞体外蕊诱导扩增以培养第10天为宜。本实验建厨立了动员人外周血来源的巨核祖细胞体外漩扩增体系。11/11【关键词】 动员人外周血赃；巨核祖细胞;体外扩增；Exviv┙oExpansionofMegaka赁ryocyticProgenitorsfromMobilizedHuma颍nPeripheralBloodA疾bstractThis studyw蜣asaimed toinvestig止atetheeffectofsome culturesystemcomp潋asedofvario

4、uscytok戚inecombinations(TP匙O，SCF，FL，IL-1，IL-3鳍，IL-6)onexvivo exp彬ansionofmegakaryocyticprogenitors  iメnduccedfromCD34+ce瘫llsofperipheralblo迁odandtoseekaoptima蠖lcytokinecombinati鸵onandculturetime.Mononuclear  cellsw菁ereisolatedfrommob硐ilized peripheralb勋lood 

5、(MPB)bydensitygradientcentrifug粜ationoverFicoll. C老D34+cellswerepurif姣iedby usingan immu特nomagneticbeadsepa静rationsystem.These啖lectedCD34+cellswe坠reseededinIscove′s傥modifiedKulbecco′smedium(IMDM)supple倩mentedwithfetalcal陴fserum(FCS)andvarious kindsofcytokin

6、侦es.After15daysofculture，thecontentof矾CD41+cells incultu窕resystemweredeterminedbyflowcytometr吆y，andthenumberofmegakaryocytecolony-草formingunit(CFU-MK11/11垛)wasmeasuredsimultaneously.Theresult详sshowedthatafterde骱finiteddaysofcultu虮re，thecytokinecomb揽ination

7、TPO/FL/IL-6/IL-3wasthemostsui奋tableforMPBtoobtai筘nhighnumberofMK，an窨dbetterthananyothe狰rthreegroups.TheincreasemultipleofCD胶41+cellswas±onday5啪and± onday10.Onday挲15，theproportionan腥dtheincrease multi妃pleofCD41+cellsdec啸reasedobviously.Th。eexpansionmultiple铌s

8、 ofCFU-MKwere ± o娜nday5and± onday10，革higherthananyother黍groups.Itisconcludedthat TPO/FL/IL-6骑/IL-3combinationwasthebest optimalfo喵rexpansionexvivo  兢ofmegakaryocytic pЫrogenitors