实验性淤热证大鼠模型的初步研究

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1、实验性淤热证大鼠模型的初步研究作者：许立，蒋宝平，过伟峰，吴勉华，方泰惠【摘要】目的探索一种建立淤热证动物模型的方法。方法间隔24h，从大鼠尾静脉注射大肠杆菌内毒素（LPS），观察给予内毒素后不同时间大鼠体温、凝血时间、血液黏度及动静脉短路血栓等指标的改变。结果与正常对照组比较，50μg/kg内毒素可引起大鼠体温升高、血液粘度的增加、凝血系统激活及血栓形成，且各指标变化的时相呈现一致性，最佳时间点是第2次给内毒素后2h。结论100μg/kg内毒素间隔24h注射，能形成实验性大鼠淤热证。【关键词】淤热证；血液流变学；血小板聚集；血栓　　Abstract：Ob

2、jectiveToexploreamethodofestablishinganexperimentalanimalmodelmixedstasis-heatsyndromeinratinvivo.MethodsThebodytemperatureandparametersofhemorrheologyonitoredatdifferenttimeafterthelipopolysaccharide(LPS)perature,viscosityofa,theactivityofcoagulation-fibrinolysissystemaltimeisthe

3、2ndhourafterthelasttreatingptomof“stasis”and“heat”ofmixedstatsis-heatsyndrome.　　Keye;Hemorrheology;Plateletaggregation；Thrombus　　全国名老中医周仲瑛教授在古人认识的基础上，结合长期临床实践，提出“淤热”这一中医病因学概念，认为淤热是指“淤”和“热”两种病理因素互相搏结、胶结合和，所形成的具有新的特质的“复合病因”，是多种外感、内伤疾病的共同病理基础，不仅存在于外感热病，而且存在于许多内伤杂病的发展过程中［1～3］。根据这一病因学说

4、，临床采用凉血化淤为基本大法，对多种病证取得满意疗效［2，4］。　　本研究根据目前对中医“淤”和“热”两种病理特征的认识，应用大肠杆菌内毒素进行淤热证动物模型的复制，为今后探讨瘀热本质，促进淤热学说的传承和发展提供研究基础，同时为中医证侯模型研究提供新的思路。　　1材料与仪器　　1.1药品和试剂大肠杆菌内毒素(LPS)，L2880，sigma公司；活化部分凝血酶原时间（APTT）测定试剂盒，北京世帝科学仪器公司，批号：ST20202-23；纤维蛋白原（FIB）测定试剂盒，北京世帝科学仪器公司，批号：ST20401-21；凝血酶原时间（PT）测定试剂盒，北京

5、世帝科学仪器公司，批号：ST10101-22；凝血酶时间（TT）测定试剂盒，北京世帝科学仪器公司，批号：ST20302-22；腺嘌呤核苷二磷酸单钠盐（ADP），sigma公司，批号：A-2754；水合氯醛，A.R，国药集团化学试剂有限公司，批号：20050525。　　1.2动物健康清洁级SD雄性大鼠(由南京中医药大学实验动物中心供给)，体重300～400g，合格证号：SYXK（苏）2005～0009。　　1.3仪器MC-3B数字式体温计，欧姆龙（大连）有限公司。LG-PABER型血小板聚集及凝血因子分析仪，LG-R-80系列血液粘度仪，北京世帝科学仪器公司

6、。　　1.4统计学处理计数资料数据以±s表示，采用Student’s-t检验。各组实验数据均以±s表示。　　变化率（%）=（给药后观测值-给药前观测值）/给药前观测值×100%　　2方法［5］　　2.1LPS对动物体温的影响取体温合格(37.8～38.7℃)大鼠20只，随机分为两组，即对照组、模型组，每组8只。实验步骤：①模型组：大鼠尾静脉注射给内毒素两次，时间间隔24h，剂量均为50μg/kg。②对照组：大鼠尾静脉注射，连续两次给予等体积生理盐水，时间间隔24h。给药容积均为5ml/kg。各组于第2次注入内毒素或生理盐水后的0.5，1，1.5，2，2.5

7、，3，4h测量大鼠的肛温，观察各大鼠体温的改变情况。　　2.2造模对动物血小板聚集率、凝血时间和对照血液流变学的影响取体温合格大鼠40只，随机分为5组，即正常对照组和模型Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组。正常对照组给予生理盐水，常规采血观测，模型组大鼠尾静脉注射给予LPS两次，时间间隔24h，剂量均为50μg/kg，在第2次给予LPS后0.5h（模型Ⅰ组），1h(模型Ⅱ组），2h（模型Ⅲ组），3h（模型Ⅳ组）采血观测。给药或生理盐水容积均为5ml/kg。　　第2次给药后，以10%水合氯醛麻醉（300mg/kg，ip），仰位固定，按上述不同时段要求颈动脉插管放血，用3.8%

8、枸椽酸钠或肝素钠生理盐水溶液（500μ/ml）按1:9抗凝，检测血