帕金森病大鼠模型的以方测证研究

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1、探索性医学综合实验—教学改革与实践（第五期）帕金森病大鼠模型的以方测证研究指导老师:何建成（上海中医药大学05中西医&05中医专业&05康复，上海201203）1研究意义帕金森病，又称震颤麻痹，多发于中老年，临床上以主要以锥体外系运动障碍为特征，表现为运动迟缓，静止震颤和强直，自主神经功能的障碍和痴呆等。原发性帕金森病最主要的化学病理为黑质神经元死亡，其致密部不能合成多巴胺，而致纹状体乙酰胆碱与多巴胺的功能失去平衡而发病，不仅影响患者的运动功能，而且对感觉、认知也有严重影响。2研究进展目前帕金森病的治疗仍然是针对其症状的控制

2、，左旋多巴迄今是帕金森病的金标准治疗药物，但因其长期使用副作用明显。尤其是运动并发症已成为晚期PD病人的主要生活障碍[1]，临床使用局限性大；而手术治疗又存在严重的破坏性，寻找能够预防和延缓疾病进程的治疗方法成为迫切需要。大量的临床和实验资料显示：中医药治疗帕金森病效果明确、良好。中药在保护神经细胞、抑制氧化应激反应、抗兴奋性毒性等方面有其独特的疗效[2]。帕金森病属于中医学”颤证”、”颤振”、”振掉”以及“肝风”等范畴，在许多中医古医籍中都有记载。然而，通过对大量的中医临床文献的整理，发现中医药将帕金森病的病因病机主要归纳

3、为“虚”、“瘀”、“痰”三个方面；治法也集中在滋补肝肾、平肝熄风，活血化瘀，蠲痰散结三种治法的应用上；应用较多的中药方剂主要有天麻钩藤汤、定振丸、桃红四物汤、涤痰汤、温胆汤等。本实验在经典的西医帕金森病动物模型基础上，进行以方测证（中医证型属性）研究，旨在探讨帕金森病动物模型的中医属性，以期为中医药治疗帕金森病的研究提供动物模型,为药效学研究等提供理论依据。3研究目的利用“以方测证”的经典研究方法，对帕金森病的中医证型进行研究。4实验材料4.1实验用药:4.1.1天麻钩藤饮：天麻9g、钩藤12g、石决明18g、山栀9g、黄芩

4、9g、川牛膝12g、杜仲9g、桑寄生9g、夜交藤9g、砂茯神9g、益母草9g。浓度为3.08g/ml。4.1.2桃红四物汤：桃仁6g、红花4g、当归12g、川芎8g、熟地黄15g、白芍10g。浓度为1.49g/ml。4.1.3涤痰汤：182探索性医学综合实验—教学改革与实践（第五期）姜半夏8g、胆南星8g、橘红6g、枳实6g、茯苓6g、人参3g、菖蒲3g、竹茹2g、甘草2g。浓度为1.12g/ml。以上中药均购自上海雷允上中药有限公司。4.2实验试剂6-hydroxydopamine（6-OHDA）：美国Sigma公司产品；

5、apomorphine（APO）：美国Sigma公司产品；抗坏血酸：美国Sigma公司产品。4.3实验仪器大鼠脑立体定位仪:TOW-3A型，广东汕头市教育医学仪器厂；微量进样器（5μl）：上海第三分析仪器厂。4.4实验动物：SD大鼠，雄性，约60只，体重150-170g，清洁级，由上海中医药大学实验动物中心提供。5实验方法5.1模型制备方法模型制备方法采用经典、公认的Ungerstedt等所创立的方法[3]。所有实验动物术前按常规进行行为测试，确认无异常旋转行为者进行正式实验。用氯胺酮80mg／kg腹腔注射麻醉。然后将大鼠固

6、定于脑立体定位仪上，头部去毛，新洁尔灭常规消毒。无菌条件下，沿正中线切开大鼠颅顶皮肤，剥离骨膜，暴露前囟。以前囟为准，根据包新民等[4]著大鼠脑立体定位图谱，确定右侧黑质两处坐标：(1)前囟后5．2mm，正中线右侧1．0mm，硬膜下9．0mm；(2)前囟后5．2mm，正中线右2．5mm，硬膜下8．5mm。用颅骨钻于手术部位小心钻开颅骨，用5μl微量进样器将6-OHDA(溶于含0．02%抗坏血酸的生理盐水中，浓度为2μg／μ1)注入右侧黑质部(以1．0mm／min速度进针)，每孔3μl，注射速度为1μl／min，注射完毕后留针

7、5min，然后以1．0mm／min速度缓慢退针。手术完成后，用医用明胶海绵填塞颅骨孔，缝合切口皮肤，肌肉注射庆大霉素，待动物清醒后放回饲养笼中饲养。10天后用阿朴吗啡（APO）经腹腔注射诱发动物向健侧旋转，以2-6圈/min者为成功模型。5.2分组及给药：采用区层随机法分组。5.2.1分组：将造模成功的SD大鼠随机分为4组：模型组、滋肾平肝组（天麻钩藤饮）、活血组（桃红四物汤）、化痰组（涤痰汤），每组6只。再另取不造模大鼠为正常对照组，每组6只。共5组。182探索性医学综合实验—教学改革与实践（第五期）5.2.2给药：滋肾平

8、肝组、活血组、化痰组分别给予天麻钩藤饮(浓度为3.08g/ml)、桃红四物汤(浓度为1.49g/ml)、涤痰汤(浓度为1.12g/ml)2ml灌胃、正常对照组给予等量生理盐水2ml灌胃[5]，持续3周。5.3检测指标及方法神经行为学：旋转圈数[6]5.4统计方法采用SPSS软件进行数据分析