牡丹叶总黄酮抑菌活性研究

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1、牡丹叶总黄酮抑菌活性研究作者：唐浩国，单方方，魏晓霞，李叶，刘严，向进乐，徐宝成【摘要】　　目的分别测定了牡丹叶总黄酮提取液、经大孔吸附树脂（D-101、HPD600）和超滤分离后的浓缩液对几种常见微生物的抑菌活性。方法以抑菌圈直径和最低抑菌浓度为指标。结果乙醇提取液对3种细菌的最低抑菌浓度(MIC)分别为：大肠杆菌5.08mg/ml，枯草芽胞杆菌2.54mg/ml，沙门氏菌1.27mg/ml；HPD600大孔吸附树脂分离浓缩液对3种细菌的MIC值分别为：大肠杆菌4.92mg/ml，枯草芽胞杆菌2.46mg/ml和沙门氏菌1.23mg/ml；

2、D-101大孔吸附树脂分离浓缩液对3种细菌的MIC值分别为：大肠杆菌3.13mg/ml，枯草芽胞杆菌3.13mg/ml和沙门氏菌0.39mg/ml；超滤工艺分离浓缩液对3种细菌的MIC值分别为：大肠杆菌4.048mg/ml，枯草芽胞杆菌4.048mg/ml和沙门氏菌1.012mg/ml。结论牡丹叶总黄酮对3种细菌均有一定的抑制作用，其中对沙门氏菌的抑制作用最为显著。【关键词】牡丹叶总黄酮抑菌活性大孔吸附树脂超滤　　Abstract：ObjectiveTostudytheantibacterialactivityoftheextractions

3、olutionandconcentratedliquidoftotalflavonoidsafterseparationofthemacroporousresin(D-101,HPD600)andultrafiltrationfromtheleavesofpeony.MethodsAntimicrobialcirclediameterandminimuminhibitoryconcentrationg/ml,Bacillussubtilis2.46mg/ml,Salmonella1.23mg/ml;theMICoftheseparationo

4、ftheHPD600concentratedliquidtothethreekindsofbacteriag/ml,Bacillussubtilis3.13mg/ml,Salmonella0.39mg/ml;TheMICoftheseparationoftheD-101concentratedliquidtothethreekindsofbacteriag/ml,Bacillussubtilis4.048mg/ml,Salmonella1.012mg/ml;TheMICoftheseparationoftheUFconcentratedliq

5、uidtothethreekindsofbacteriag/ml,Bacillussubtilis2.46mg/ml,Salmonella0.39mg/ml.ConclusionThetotalflavonoidsfromleavesofpeonyhaveacertaineffectonthethreekindsofbacteria,buttheeffectofSalmonellaisthemostnotablerespectively.　　Keyl圆底烧瓶中，精密加入25倍量60%的乙醇，在80℃条件下加热回流提取提取3h，过滤，离心分离，

6、用相应浓度的乙醇定容到100ml，备用。黄酮纯度为5.27%。　　　1.1.3大孔吸附树脂分离纯化牡丹叶总黄酮粗提液将牡丹叶干粉于60%的乙醇、80℃、料液比1∶25的条件下浸提3h，抽滤，滤液于旋转蒸发器中50℃下减压浓缩至无醇味，回收乙醇。浓缩液用蒸馏水溶解，定容，测定吸光度，计算总黄酮含量，最后取一定量浓缩液再用蒸馏水定容，使其浓度为0.250mg/ml左右，得稀释液。分别称取预处理好的大孔吸附树脂各8.0g于250ml具塞三角瓶中，加入样品溶液240ml，室温下放置8h，过滤，滤去树脂，用蒸馏水洗脱，洗至无醇味，再用160ml的70%

7、的乙醇水溶液进行洗脱6h，过滤，旋转蒸发浓缩洗脱液，得样液，备用。HPD600得到的黄酮的纯度为15.11%，D-101树脂得到的黄酮纯度为17.60%。　　1.1.4牡丹叶黄酮的超滤分离用切割分子量为10000Da，膜面积为50cm2的超滤设备进行分离。黄酮纯度为40.58%。1.2培养基的配制普通营养琼脂培养基：蛋白胨10g，牛肉膏5g，氯化钠5g，琼脂20g，蒸馏水1000ml。lkgf.cm-2灭菌15min。　　1.3菌悬液的制备把大肠杆菌(Escherichiacoli)、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)和沙门氏菌

8、（Salmonella）原菌种接种于普通营养琼脂培养基斜面上，37℃培养20～22h，用l0ml灭菌生理盐水洗下菌苔备用。把上述菌悬液分别用灭菌的生理盐水配制成含菌