黄芩总黄酮提取技术及其抑菌活性研究

《黄芩总黄酮提取技术及其抑菌活性研究 》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、黄芩总黄酮提取技术及其抑菌活性研究【摘要】　　目的研究黄芩中的黄酮提取方法和抗菌活性。方法利用超声波技术通过正交实验提取黄芩中的黄酮，杯碟法对其进行抗菌活性的研究。结果超声波最佳的提取条件为功率235in，黄酮提取率为10.35%。该提取液对金色葡萄球菌、枯草杆菌、大肠杆菌、黑曲霉、青霉都有明显的抑菌效果，最低抑菌浓度分别为：1.0，2.0，1.0，0.5，1.0mg·ml-1；最小杀菌浓度为：1.0，2.0，2.0，2.0，1.0mg·ml-1。结论超声波技术是提取黄芩黄酮的高效方法，黄芩具有较强的

2、抗菌活性。【关键词】超声波提取黄芩黄酮抑菌活性　　黄芩ScutellariabaicalensisGeorgi为常用中药之一，是唇形科植物黄芩的干燥根〔1〕。其有效成分主要为黄酮类化合物。据报道，黄芩黄酮是一类生物活性较强的天然产物，具有抗菌、抗病毒、抗炎、抗氧化、抗肿瘤、降血压等作用〔2，3〕。超声波具有加速药材中有效成分溶解、缩短提取时间、提高有效成分的提取率等优点〔4〕，因此，本文通过正交实验探讨超声波提取黄芩黄酮的最佳提取条件，为大规模高效生产黄芩黄酮提供了有力的理论依据。黄芩黄酮的体外抗菌的

3、研究较少，本研究将最佳提取条件下的黄酮提取液对一些细菌和真菌进行了抑菌实验，旨在开发一种天然的抑菌剂，并为临床用药提供理论依据。　　1材料　　黄芩购于湖南长沙康尔佳药店，粉碎过40目筛，80℃烘干备用。芦丁对照品购于中国上海医药化学试剂公司；供试菌种金色葡萄球菌、枯草杆菌、大肠杆菌、黑曲霉、青霉由本实验室保存并培养。　　2方法　　2.1提取方法　　超声波提取法：称取黄芩粉5.0g，采用L9（34）按表1方法进行超声波提取，提取液过滤，合并滤液，定容至100ml，摇匀备用。表1因素水平（略）　　对比实验

4、：①煎煮法：称取黄芩粉5.0g，加水100ml，浸泡30min，煮沸后，文火煎60min，过滤，共煎煮两次，合并滤液，定容至100ml，摇匀备用。②连续回流提取法：称取黄芩粉5.0g，加60%乙醇100ml，水浴回流90min，过滤，共提取两次，合并滤液，定容至100ml，摇匀备用。　　2.2标准曲线的制作　　称取在105℃下干燥恒重的芦丁对照品10mg，用95%的乙醇溶解，摇匀，定容至10ml使之成为浓度为1mg·ml-1的芦丁标准品溶液，作为储备液备用。量取上述溶液0，0.1，0.2，0.3，0.

5、4，0.5，0.6ml，分别加水至3ml，加5%的亚硝酸钠溶液0.5ml，放置6min，加10%的硝酸铝溶液0.5ml，摇匀，放置6min，后加5%的氢氧化钠溶液2.5ml，混匀，放置15min后蒸馏水定容10ml，用紫外分光光度计在510nm处测其吸光度，得到回归方程为：A＝9.9339C－0.00173（R2=0.9975）。　　2.3黄芩黄酮的抑菌实验采用杯碟法测定　　其抑菌作用，取浓度106～107CFU/ml的各种待试菌悬液0.2ml，与相应灭菌培养基15ml混合制成混菌平板，凝固后，在平板

6、上等距离放入4个灭菌牛津杯，每个菌设置3个重复，一个无菌生理盐水为对照，取0.1ml黄酮提取液加入牛津杯中，细菌37℃，真菌28℃培养18～24h后，移去牛津杯，量取抑菌圈直径，直径越大抗菌活性越强。　　2.4最低抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)的测定　　用无菌水将黄芩黄酮提取液稀释，终浓度分别为4，2，1，0.5，0.25mg·ml-1。取2ml提取稀释液至15ml培养基，混匀后，倒入平板，凝固后加入100μl106～107CFU/ml的菌液，涂布均匀，放至37℃/28℃培养24h后观察结

7、果。菌落被完全抑制的最高稀释度提取物浓度即MIC。培养48h后，菌落被完全抑制的最高稀释度提取物浓度为MBC。表2正交实验结果（略）　　利用L9（34）正交实验法优化黄芩黄酮提取条件结果（见表2），各因素对实验结果影响顺序为C>A>B>D，即乙醇浓度对黄酮提取率的影响效果最为显著，其次是超声波功率。最佳提取条件为A3B3C2D3，即在功率为235in条件下黄芩提取液黄酮含量最高。以该最佳提取条件进行验证实验，黄芩黄酮提取率为10.35%，RSD＝0.70%（n＝6），因此该最佳提取条

8、件是可行的。　　2.5提取方法的比较　　结果见表3。由表3可知，超声波提取方法的提取率明显高于其它两种方法，且提取时间最短，提取溶剂用量最少。表3不同的提取方法与黄酮含量的关系（略）　　2.6抑菌圈的确定　　结果见表4。由表4可以看出黄芩黄酮提取液对金色葡萄球菌、枯草杆菌、大肠杆菌、黑曲霉、青霉都有较强的抑菌效果。而且对细菌的抑制效果强于真菌。表4黄芩黄酮提取液的抑菌效果（略）　　2.7最低抑菌浓度和最低杀菌浓度的确定　　结果见表5。由表5可知，黄芩黄酮