欢迎来到天天文库
浏览记录
ID:9510660
大小:56.00 KB
页数:7页
时间:2018-05-02
《dxs8378基因座等位基因分型标准物的制备及其遗传多态性》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在应用文档-天天文库。
1、DXS8378基因座等位基因分型标准物的制备及其遗传多态性【关键词】分型标准物短串联重复序列重组质粒遗传多态性DXS8378 ABSTRACT:ObjectiveToinvestigatethegeicpolymorphismofDXS8378STRlocusofchromosomeXinChineseLisu,PumiandDeangpopulationsinYunnanandconstructrelativestandardallelicladders.MethodsAfterbeinga
2、mplifiedbyPCR,differentSTRallelicfragmentsthePAGelectrophoresis.TheSTRallelicfragmentsplifiedbyPCRtoobtainpurifiedallelicfragments.Next,thepurifiedallelicfragmentsidvectors,andthesizeandstructureoftheinsertsedbytheanalysisoftheirDNAsequences.ThenidsDN
3、Aplateforreamplificationtogeneratethestandardladders.ResultsThestandardallelicladderforDXS8378locusorphismsofDXS8378locusinthreeChinesepopulationsinYunnanadebythismethodisexcellent,andDXS8378isporepeat;rebinedplasmid;geicpolymorphism;DXS8378 人类X染色体由于
4、其独特的遗传方式[1],在X染色体连锁遗传病的基因定位、遗传病的基因诊断和法医学的性别鉴定等多方面具有重要的价值。两个多态信息含量(polymorphisminformationcontent,PIC)相当的STR位点作比较时,X染色体上的STR位点的平均排除率(meanexclusionchance,MEC)比常染色体上的位点要高的多。因此,在姐妹认定和女性的父权鉴定等法医学领域中,X染色体特异性的STR有重要的应用价值[24]。 用PCR扩增和聚丙烯酰胺凝胶电泳技术分析STR基因座时,分型
5、是依据谱带的位置,而采用分子克隆技术制备大量优质的等位基因分型标准物,既可以提高分型的准确性,又可以增加实验结果间的可比性。目前,分型标准物主要依靠国外几家试剂大公司提供,其价格昂贵,对于新发现的STR位点,其分型标准物在市场上也无法购得。同时,一些在中国群体中识别机率和非父排除概率高的STR位点的分型标准物不能提供[56]。为此,我们应用分子克隆技术,在国内外首先制备出DXS8378位点的STR分型标准物。应用自制的分型标准物,首次调查了中国云南地区傈僳、普米[7]、德昂族群体中的DXS837
6、8基因型分布频率,对其在法医学中的应用价值进行评价,对实现以此技术为基础的STR分型标准物的标准化、国产化进行了探索[8]。 1材料与方法 1.1样本与引物遵循知情同意原则,随机抽取中国云南地区93名普米族(其中女性37名)、95名傈僳族(其中女性38名)和83名德昂族(其中女性38名)群体中无亲缘关系个体的静脉血,EDTA抗凝,-20℃保存。引物序列查自GenBank,分别为F:CACAGGAGGTTTGACCTGTT;R:AACTGAGATGGTGCCACTGA,由奥科公司合成。 1.2
7、试剂与仪器2×Taqpolymerasemix和DH5α感受态细胞(天为时代公司);pGEMTEasyVectorSystemⅠ(美国Promega公司);聚丙烯酰胺凝胶DNA回收试剂盒(Biospin公司);EDTA等其余试剂均为国产分析纯。台式高速离心机(德国Hermle公司);微量可调加样器(10、20、50、100、200、1000μL)(法国Gilson公司);三相恒压电泳仪(美国BiaRad公司);干热器(美国Bellco公司);旋涡混匀器(日本Tomykogyo公司);超净工作
8、台(中国扬州医疗设备厂);低温冰箱(-30℃,-70℃)(日本Sanyo公司);ABI3730自动测序仪(美国ABI公司)。 1.3制备标准分型物模板DNA通过Chelex法提取云南普米族、傈僳族和德昂族群体样本DNA,PCR扩增,反应体系:总体积13μL,2×Taqpolymerasemix6μL,引物1μL(5nmol/L),DNA2μL,H2O2μL。反应条件为:变性94℃30S,退火61℃45S,延伸72℃60S,共30个循环。 用60g/L变性聚丙烯酰胺凝胶(交联度5
此文档下载收益归作者所有