dxs6804基因座等位基因分型标准物的克隆制备及其群体遗传学研究

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1、DXS6804基因座等位基因分型标准物的克隆制备及其群体遗传学研究【摘要】　　目的用分子克隆技术制备DXS6804基因座等位基因分型标准物，并用于中国云南普米族人群的群体遗传学研究，解决长期困扰短串联重复序列分型上存在的准确性和标准化问题。方法用PCR扩增出DXS6804基因座的各等位基因片段，PCR产物克隆后，DNA测序证实插入片段的大小和结构，按国际标准进行命名后，经扩大培养、扩增及再鉴定后，制备出该基因座的等位基因分型标准物，进行群体研究。结果调查了中国云南地区普米族人群基因座的基因型分布频率，发现D

2、XS6804基因座两个分型标准物外等位基因。结论分子克隆技术是制备等位基因分型标准物的可靠方法，DXS6804基因座是一个适合我国法医学和群体遗传学分析的遗传标记。【关键词】等位基因分型标准物；短串联重复序列；遗传多态性　　StudyontheconstructionofstandardDXS6804allelicladderviamolecularcloninganditsgeneticpolymorphism　inChineseyunnanpumipopulations　　ABSTRACT:Object

3、iveToresolvetheproblemoftheaccuracyandstandardizationofSTRPCRtypinginforensicpractice,constructDXS6804allelicladderbymolecular13clonningandapplytheminapopulationstudyonthePumipopulationinYunnan,China.MethodsPCRwasusedtoproduceseveraldifferentallelicfragme

4、ntsofthelocus.AftercloningthePCRproducts,therecombinantplasmidsweresequenced.Thenwedenominatedthemandusedthemastemplateforreamplificationtogeneratethelocusstandardladder.ResultsThesequencingresultsconfirmedthatthesizeandtheconstructionoftheinsertswerecorr

5、ect.ThegeneticpolymorphismsofthislocusinYunnanPumipopulationofChinawerestudied.TwooffladderallelesofDXS6804locuswerefound.ConclusionThismethodisofhighvalueforforensicDNAtypingtoconstructstandardladders.DXS6804isrobustforgeneticresearchandforensicapplicati

6、on.　　KEYWORDS:allelicladder;shorttandemrepeats;geneticpolymorphism　　短串联重复序列(shorttandemrepeats,STR)是一类在人类基因组中分布广泛并且具有高度多态性的遗传标记。具有分型检测所需检材量少、尤其适合降解DNA的扩增等优点，被广泛应用于法医学个体识别和同一认定以及民事案件中的亲权鉴定[1132]。特别是X染色体STR基因座，具有扩增片段短、等位基因多、分型方法简单、多态信息含量高的优点，更受到格外关注。而且它特别适用

7、于法医学实践中在母方缺如(去世或失踪)情况下兄弟姐妹的亲权鉴定，另外，也可以作为性别的辅助鉴定，为法医学研究提供了一种新的工具。但是，由于目前已知的X染色体多态性遗传标记的数量较少，适用于法医学的更少，而且其研究方法还处于摸索阶段[3]。　　等位基因分型标准物(allelicladder)是人群中常见的等位基因混合物，用来与未知样品比对确定基因型。只有具备了一套精确的、国际标准化命名的标准参照物，才有可能对STR分型结果作出正确的判型和命名,STR数据才能在各实验室之间进行交流和合作[4]。为此，我们应用分

8、子克隆技术，在国内外首先制备出DXS6804基因座的等位基因分型标准物。应用自制的等位基因分型标准物，首次调查了中国云南地区普米族人群基因型分布频率，评价该基因座在法医学和群体遗传学中的应用价值。　　1对象与方法　　1.1对象　　1.1.1样本遵循知情同意原则，随机抽取中国云南地区100名普米族(其中女性49名)群体中无亲缘关系个体的静脉血，EDTA抗凝，-70℃保存。13　　1.1.2引物引物序列查自GenBa