表没食子儿茶素没食子酸酯抑制地塞米松体外诱发兔白内障的作用

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1、表没食子儿茶素没食子酸酯抑制地塞米松体外诱发兔白内障的作用【摘要】　　目的：观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对抑制地塞米松(Dex)诱导体外培养兔晶状体上皮细胞(LEC)凋亡的作用。方法：采用体外培养正常家兔晶状体，随机将家兔晶状体分为3组：空白对照组(A)；Dex（10μmol/L）处理组(B)；Dex+EGCG（10mmol/L）实验组(C)。分别于3，5，7d培养结束后观察各组晶状体的透明度，并进行相关比较及统计学分析。TUNEL法检测EGCG对Dex诱发的兔LEC凋亡细胞数量的影响，并进行相关比较及统计学分析。结果：EGCG实验组晶状体透明

2、性均低于空白对照组，但高于Dex处理组，差异有显著统计学意义(P＜0.01)；Dex处理组LEC凋亡率显著高于空白对照组（P＜0.01）；Dex处理组与EGCG实验组比较，有显著性差异（P＜0.01）。结论：EGCG可抑制Dex损伤所诱导兔LEC调亡，具有明显抑制激素性白内障形成的作用。【关键词】表没食子儿茶素没食子酸酯;白内障;地塞米松；晶状体上皮细胞；凋亡　　AbstractAIM:Toobservetheinhibitoryeffectofepigallocatechingallate(EGCG)onapoptosisoflensepithelia

3、lcell(LEC)ofrabbitsdexamethason（Dex）peroxideinduced.METHODS:Culturednormalrabbitlensinvitrolydividedinto3groups:thecontrolgroup（A）,thegrouptreatedbyDex(10μmol/L)（B）,thegrouptreatedbyDexperoxideandEGCG(10mmol/L)（C）.Thetransparenceandapoptosisratiooflensonthetimepointsof3,5,7daysine

4、dbyimageanalysisandfloetry,asinaldeoxyribonucleotidetransferasemediatedUTPnickendlabeling（TUNEL）detection，theeffectofEGCGonthenumberofdexamethasoninducedrabbitLECined，therelatedparisonsandstatisticalanalysesonggroupsethodrevealedthattheapoptosisrateofLECinDexgroupentofthecatarac

5、t.　　KEYA公司）；DMEM培养基（Hyclone公司）；TUNEL试剂盒（武汉boster公司）。正常成年家兔50只，经耳缘静脉注射空气形成栓塞致死，立即摘取眼球于超净工作台后路法小心取出晶状体，清除干净玻璃体，置入含青霉素80万U+庆大霉素8万U的生理盐水500mL中，1min后取出置入5mLDMEM低糖培养液（含100mL/L小牛血清，100kU/L青霉素图1培养晶状体上皮细胞(HE×400)A：空白对照组;B：Dex模型组;C：EGCG组。和100kU/L链霉素）的12孔培养板内，每孔一个晶状体，于37℃，50mL/LCO2培养箱内培养6h，

6、选取透明晶状体作为下一步实验对象，其中10只晶状体可能由于手术损伤或其他原因致其混浊而被排除，留取90只透明晶状体备用。　　　　1.2　方法　　对照组(A组)：将筛选后的透明晶状体30只置于DMEM培养液5mL的12孔培养板内，每孔1个晶状体，置于37℃，50mL/LCO2培养箱内培养，每12h更换一次培养液以确保营养充足。处理组(B组)：将筛选后的透明晶状体30只置于DMEM+Dex（终浓度为10μmol/L）培养液5mL的12孔培养板内，每孔1个晶状体,置于37℃，50mL/LCO2培养箱内培养，每12h更换一次培养液以确保营养充足。实验组(C组)：用

7、DMEM配置100mmol/LEGCG母液，将筛选后的透明晶状体30只置于C组:含DMEM+Dex（终浓度为10μmol/L）+EGCG（终浓度为10mmol/L）培养液5mL的12孔培养板内，每孔1个晶状体,置于37℃，50ml/LCO2培养箱内培养，每12h更换1次培养液以确保营养充足。于培养结束后，将12孔培养板置于带有2mm×2mm黑色网格的透明胶片上分析。晶状体混浊程度参照Azuma等的标准分为5级：Ⅰ级：无混浊，晶状体透明；Ⅱ级：轻度混浊，晶状体周边出现空泡；Ⅲ级：中度混浊，晶状体周边空泡向中心扩展，核出现雾状混浊；Ⅳ级：高度混浊，晶状体周边空

8、泡扩展到核区，核雾状混浊加重；Ⅴ级：核混浊，白内障成熟。观察晶状体