il18基因转染对小鼠卵巢癌ovhm体外增殖及体内成瘤的影响

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1、IL18基因转染对小鼠卵巢癌OVHM体外增殖及体内成瘤的影响：崔澂,郝淑维,李新伟,白小嘉,程建新,单保恩【摘要】　　目的:分析转染IL18基因后,对小鼠卵巢癌OVHM细胞体外增殖、凋亡及体内成瘤的影响,初步探讨IL18基因转染治疗卵巢癌的应用价值。方法:将逆转录病毒携带的小鼠IL18基因成功转染至OVHM（OVHM/IL18）,以空载体转染的OVHM（OVHM/LXSN）和野生型（OVHM）作为对照。分别采用MTT、FCM检测体外培养细胞的增殖、凋亡及周期分布。于裸鼠皮下分别接种细胞,观察各组种植瘤生长情况,计算成

2、瘤率;RTPCR检测瘤组织中IL18mRNA表达;FCM和电镜分析肿瘤细胞增殖、凋亡状况。结果:3组细胞的体外增殖未见明显差异,均无明显凋亡现象,增殖指数、细胞周期分布均无明显差异（均P>0.05）。接种后,3组裸鼠的成瘤率相同,但OVHM/IL18组成瘤时间较晚,随瘤龄增长肿瘤生长缓慢,瘤组织中IL18mRNA阳性表达。OVHM/IL18组裸鼠种植瘤细胞可见典型的凋亡现象,G0/G1期细胞明显增多,S期细胞明显减少,增殖指数明显降低,凋亡指数明显增高（P<0.01）。结论:IL18基因成功转染后,虽对

3、体外卵巢癌细胞无直接毒性,但可能在体内借助非直接杀伤的其他途径,通过阻断细胞周期、促进肿瘤细胞凋亡等抑制体内成瘤。【关键词】IL18基因转染OVHM增殖凋亡成瘤　　［Abstract］AIM:ToinvestigatetheeffectsofIL18genetransfectiononproliferation,apoptosisandtumorigenesisofmouseovariancancercelllineOVHM.METHODS:OVHMeasuredbyMTTandFCMrespectively.Thenude

4、miceor’sgroorigenesisratioade.TheexpressionofIL18mRNAintumortissuesorcellintissueicroscopeandFCM.RESULTS:Thethreecellsculturedinvitroshoorigenesisilarinallthethreegroups.ButinOVHM/IL18group,thelatentperiodoftumorigenesisorgroRNAintumortissue.Itorcellsfromnudemicei

5、noculatedbyOVHM/IL18,thecellsinphaseofG0/G1increasedorphologyofapoptosis,andthoseinSphasedecreasedorigenesisofOVHMinvivoorcells.　　［Keyorigenesis　　IL18是1995年发现的具有抗瘤作用的重要免疫调节因子［1］;卵巢癌是妇科常见恶性肿瘤之一,死亡率位居女性生殖系统肿瘤首位［2］。研究证实,随着卵巢组织从正常向良性及恶性肿瘤的转变,组织中IL18mRNA及蛋白表达递减直至缺如［3］

6、。提示,若将IL18基因导入卵巢癌细胞,纠正其缺陷表达,则可能有效诱导IL18的抗瘤效应。因此,我们研究了IL18基因成功转染至小鼠卵巢癌OVHM细胞后,对体外肿瘤细胞的直接杀伤及体内成瘤的影响,初步探讨将IL18基因作为优选靶对卵巢癌进行基因治疗的可行性。　　1材料和方法　　1.1材料OVHM由日本大阪大学医学院HiromiFujia公司产品;TRIzol为美国Gibco公司产品;RTPCR试剂盒为华美生物工程公司产品;βactin、IL18引物序列查自GenBank,经Premier5.0软件分析核对,由上海

7、生工生物技术有限公司合成。ABI5700型PCR循环仪为美国ABI公司产品;FOTODYNE602107型凝胶成像分析系统为美国Image公司产品;H500型透射电镜为日本日立公司产品;Mk353型酶联免疫检测仪为芬兰ThermoLabsystems产品;Vantage流式细胞仪为美国BD公司产品。　　1.2方法　　1.2.1小鼠IL18基因转染OVHM细胞分别取达80%融合的PA317/IL18及PA317/LXSN细胞,培养24h后收集病毒原液上清;取对数生长期OVHM,将2×105个细胞接种于6cm培养皿中,24

8、h后弃去上清,加入病毒原液上清及新鲜培液各1mL,并加入polybrene（终浓度为8mg/L）培养3h后,补加培养液稀释的polybrene至2mg/L,再培养24h。以终浓度400mg/L的G418进行阳性克隆筛选,200mg/LG418维持逐步扩大培养,20d后分别获得