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时间:2018-04-30
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1、基于小鼠模型探析哮喘的发病机制[摘要]目的探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/真核生物始动因子4E结合蛋白1(4EBP1)/缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/血管内皮生长因子(VEGF)信号通路在哮喘小鼠中的表达及意义。方法40只SPF级6~8周龄雌性Balb/c小鼠随机分为对照组、哮喘组、布地奈德干预组及mTOR抑制剂(雷帕霉素)干预组,每组10只。卵清蛋白致敏激发建立哮喘小鼠模型,各干预组分别在激发前30min给予雷帕霉素3mg/kg腹腔注射或布地奈德混悬液1mg雾化吸入,对照组和哮
2、喘组以生理盐水代替。于末次激发24h后处死小鼠,收集肺泡灌洗液(BALF),采用ELISA法测定HIF-1α、VEGF水平;取肺组织行苏木精-伊红(HE)染色观察其病理变化;免疫组化染色和ethodsFortySPFlevel6-8aleBalb/Cmicelydividedintocontrol,asthma,budesonideandmTORinhibitor(rapamycin)interventiongroups(n=10each)。Theasthmaticmousemodelinisteredy
3、cinatthedosageof3mg/kgbyanintraperitonealinjectionorbudesonidesuspensionatthedosageoflmgbyaerosolinhalationrespectively30minutesbeforetheOVAchallenge.Thecontrolandasthmagroupsalsalineinstead.TheconcentrationsofHIF-1αandVEGFinbronchoalveolarlavagefluid(BAL
4、F)inedusingELISA24hoursafterthelastchallenge.Thepathologicalchangesoflungtissueatoxylin-eosin(HE)staining.Thep-mTORandp-4EBP1fromthelungtissuesmunohistochemistryandammaliantargetofrapamycin;Eukaryoteinitiatingfactor4Ebindingprotein1;Hypoxiainduciblefactor-1&alp
5、ha;;Vascularendothelialgroammaliantargetofrapamycin,mTOR)是一种高度保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,由于处于生长调节的中心环节而倍受关注,在炎症损伤、免疫应答及肿瘤等方面发挥重要作用[2-3].研究发现mTOR高表达也同样存在于哮喘中,这可能因为mTOR参与了哮喘气道炎症浸润及气道重塑等病理过程[4],而mTOR抑制剂雷帕霉素能阻断这一过程抑制哮喘的发生,但mTOR是如何通过下游靶蛋白参与哮喘的发生少见相关报道。真核生物始动因子4E结合蛋白1(eukaryotei
6、nitiatingfactor4Ebindingprotein1,4EBP1)是mTOR下游的一个重要靶蛋白,激活后可促进包括缺氧诱导因子-1α(hypoxiainduciblefactor-1α,HIF-1α)、血管内皮生长因子(vascularendothelialgroTOR可能通过激活4EBP1从而引起HIF-1α及VEGF表达增加促进哮喘发生,而磷酸化的mTOR、4EBP1(即p-mTOR、p-4EBP1)被认为是该信号通路激活的标志,本研究通过建立小鼠哮喘模
7、型,检测肺组织p-mTOR、p-4EBP1及肺泡灌洗液中HIF-1α、VEGF的表达,从而进一步明确哮喘的发病机制,寻找有效治疗哮喘的新方法。 1材料与方法。 1.1实验动物与试剂。 SPF级6~8周龄雌性Balb/c小鼠40只,体重为18~22g,由河南省动物实验中心提供。p-mTOR、p-4EBP1抗体(美国SantaCruz公司),雷帕霉素、卵清蛋白(OVA)(美国Sigma公司)。 1.2动物模型制备与分组。
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