番茄microrna828的克隆表达及其靶基因的鉴定

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1、园艺学报ActaHorticulturaeSinica2015，42(1)：47–55.doi：10.16420/j.issn.0513-353x.2014-0782；http：//www.ahs.ac.cn47番茄LemiR828的克隆表达及其靶基因的鉴定*刘伟伟，于丽丽，方媛，周莹，李洋，周波（东北林业大学生命科学学院，哈尔滨150040）摘要：以番茄（Lycopersicumesculentum）LA1996（Aft基因型，紫色花青素积累品系）cDNA为模板，对LemiR828前体基因和预测到的靶基因LeTAS4（Trans-ActingSiRNAGen

2、e4）进行克隆，采用RT-PCR技术检测其在番茄果实发育中的差异表达，并用RLM5′RACE技术验证LemiR828对预测靶基因LeTAS4mRNA的剪切作用及靶作用位点。结果表明，LemiR828的前体序列含有完整的茎环结构；在果实发育成熟的过程中，LemiR828及LeTAS4在番茄中的表达量存在差异。在绿色果阶段的表达量较低且LemiR828对LeTAS4的负调控关系不明显；而在成熟果阶段，LemiR828及LeTAS4的表达量均升高，且存在明显的负调控关系。LemiR828能够靶作用于LeTAS4的转录本上调控其降解，其剪切位点为LemiR828序列5

3、′端的第10位碱基。因此，在LA1996番茄果实发育过程中，LemiR828和LeTAS4参与果实发育的调控，并且LemiR828负调控其靶基因LeTAS4的表达。关键词：番茄；LemiR828；LeTAS4；花青素合成中图分类号：S641.2文献标志码：A文章编号：0513-353X（2015）01-0047-09CloneandExpressionAnalysisofLemiR828andIdentificationofItsTargetGeneinTomato*LIUWei-wei，YULi-li，FANGYuan，ZHOUYing，LIYang，and

4、ZHOUBo（CollegeofLifeScience，NortheastForestryUniversity，Harbin150040，China）Abstract：InordertounderstandthecharacterofLemiR828intomato（Lycopersicumesculentum）LA1996（withanthocyaninfruit，Aft），theprecursorsequenceandpotentialtargetgeneofLemiR828wereobtainedbyPCRusingcDNAastemplate.Thee

5、xpressionofLemiR828anditstargetgeneintomatofruitswerealsoevaluatedbyreal-timequantitativePCR.LemiR828-guidedcleavageandthetargetsiteidentifiedonputativeTrans-ActingSiRNAGene4（LeTAS4）mRNAwerevalidatedusingRLM5′RACE.TheprecursorsequenceofLemiR828wasshowntocontainacompletehairpinstruct

6、ure.Moreover，theexpressionofLemiR828anditstargetgeneLeTAS4intomatofruitsdifferedindevelopmentalstages.Duringgreenfruitstages，thetranscriptionallevelofLemiR828andLeTAS4werelowanddidnotseemtoberelatedtonegativeregulation；However，inmaturefruitstages，theirexpressionwashigh，andLemiR828ne

7、gativelyregulatedtheexpressionofLeTAS4.ThematureLemiR828targetedasequenceofhighthcomplementarityinLeTAS4mRNAandshearedthe10positioninLeTAS4mRNAfromLemiR8285end.收稿日期：2014–10–27；修回日期：2014–12–15基金项目：东北林业大学国家基础科学人才培养基金——科研训练及科研能力提高项目子项目（201220A5）；国家自然科学基金项目（30800082和31272200）；中央高校基本科研业

8、务费专项资金项目（DL11CA03，2