mir-222在胃癌中的表达分析及其靶基因fos的鉴定

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1、miR-222在胃癌中的表达分析及其靶基因FOS的鉴定朱恩东,李娜,肖斌,黎伯胜,毛旭虎,邹全明(400038重庆，第三军医大学医学检验系临床微生物学及免疫学教研室暨国家免疫生物制品工程技术研究中心)[摘要]目的分析miR-222在胃癌中的表达水平并鉴定miR-222的靶基因，为进一步研究miR-222在胃癌发生发展过程中的作用奠定基础。方法由重庆新桥医院收得10例病人的胃癌及远癌组织，匀浆法提取总RNA，用Real-timePCR法检测miR-222表达。利用miRNA靶基因预测数据库TargetScan，MICROCO

2、SM及PicTar对miR-222的靶基因进行预测。化学合成包含有miR-222结合位点的靶基因3’非编码区（3’UTR）退火引物，插入荧光素酶报告载体pMIR-REPORT及绿色荧光蛋白（GFP）报告载体PMIR-GFP-REPORT，通过检测荧光素酶的活性变化及观察GFP表达量，并在蛋白水平用Westernblot检测miR-222对靶基因的抑制。结果miR-222在70%（7/10）的胃癌组织样本中表达上调。生物信息学（TargetScan，MICROCOSM及PicTar三个miRNA靶基因预测数据库）分析可得在包

3、括人类在内的不同物种中，FOS基因3’UTR区都有miR-222的保守结合种子序列。通过荧光素酶活性检测和GFP抑制试验可得miR-222在mRNA水平可以与FOS基因结合。Westernblot结果显示miR-222可以抑制c-fos蛋白表达。结论miR-222在胃癌样本中表达上调，证明FOS为miR-222的一个靶基因，为后续研究miR-222在胃癌发生发展中的功能奠定了基础。[关键词]miR-222；FOS；胃癌[中图法分类号]Q503,R735.2[文献标志码]AIdentificationofFOSasanove

4、ltargetofmiR-222up-regulatedingastriccancerZhuEndong,LiNa,XiaoBin,LiBosheng,MaoXuhu,ZouQuanming(DepartmentofClinicalMicrobiologyandImmunology,CollegeofMedicalLaboratoryScience,ThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing400038,China)[Abstract]ObjectiveToanalyzetheexpr

5、essionofmiR-222ingastriccancerandidentifythetargetofmiR-222soastolaynecessarybasisforresearchonthefunctionofmiR-222intheinitiation,developmentofgastriccancer.MethodsFirst,tenpairedgastriccancerandadjacentnontumorgastricmucosatissueswereobtainedfrompatientsofXinqia

6、oHospital(Chongqing),thetotalRNAwereextractedbyTrizolreagentwithhomogenizers.Real-timePCRwasperformedtodetecttherelativelevelofmiR-222.Next,thepotentialtargetofmiR-222waspredictedusingthreecurrentlyavailablepredictionprograms,includingTargetScan,MICROCOSM,PicTar.F

7、OSwaschosenbecauseitwaspredictedbyallthethreeprograms.The3’UTRsequenceofFOSwasobtainedbychemicalsynthesis.ThisfragmentwasclonedintothepMIR-REPORTandPMIR-GFP-REPORT,FOSwasvalidatedasatargetofmiR-222bydiversityassayofluciferaseactivityandtheGFPexpression.Finally,wes

8、ternblotwasperformedtoassaythatifFoswasdown-regulatedbymiR-222atthetranslationallevel.ResultsmiR-222wasupregulatedin70%gastriccancertissues(7/10).Itwasf