mir-499a在肝癌细胞中的表达及其靶基因的研究

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1、miR-499a在肝癌细胞中的表达及其靶基因的研究张靖南，曹漪伊，王丹，吴婷，熊冬梅，黄爱龙，汤华（重庆医科大学感染性疾病与分子生物学重点实验室，重庆，400016）［摘要］目的探讨HBV、miR-499a及CFLAR在肝癌细胞中的关系。方法通过实时定量聚合酶链反应(Real-timePCR)检测miR-499a在有HBV复制的肝癌细胞中的表达；通过Real-timePCR、双荧光素酶报告系统、Western-blot证明CFLAR是否为miR-499a的靶基因。结果miR-499a在HepG2.2.15细胞中的表达高于HepG2细胞，在Ad-HBV-HepG2细胞中的

2、表达高于Ad-GFP-HepG2细胞；过表达miR-499a之后在mRNA和蛋白水平发现CFLAR表达降低，抑制miR-499a表达之后在mRNA和蛋白水平发现CFLAR表达升高；miR-499a通过与CFLAR的3’UTR作用来抑制其表达；HBV在mRNA水平降低CFLAR的表达。结论在肝癌细胞中HBV上调miR-499a的表达，CFLAR是miR-499a的靶基因。［关键词］HBV;miR-499a;CFLAR;HCC［中图分类号］R373.2+1TheexpressionofmiR-499aanditstargetgeneinhepatomacellsZhangJ

3、ingnan,CaoYiyi,WangDan,WuTing,XiongDongmei,HuangAilong,TangHuaKeyLaboratoryofMolecularBiologyonInfectiousDiseases,MinistryofEducation,ChongqingMedicalUniversity,Chongqing,400016,China［Abstract］ObjectiveToinvestigatetherelationshipamongHBV,miR-499aandCFLARinhepatomacells.MethodQRT-PCRwasu

4、sedtodeterminetheexpressionofmiR-499ainHBV-expressingcells.QRT-PCR,Westernblotanddual-luciferasereporterassaywereperformedtoinvestigatewhetherCFLARisatargetgeneofmiR-499a.ResultsmiR-499awasup-regulatedinHepG2.2.15cellsandAd-HBV-HepG2cellscomparedwiththeircontrolgroups,respectively.QRT-PC

5、RandwesternblotanalysisrevealedthatCFLARexpressionsweredecreasedaftermiR-499awasoverexpressed,andincreasedwhenmiR-499awasinhibitedinSMMC7721cells.miR-499ainhibitedCFLARexpressionbyspecificallytargetingitsmRNA3’UTR.ConclusionHBVcouldup-regulatemiR-499aexpressionandCFLARisoneoftargetgeneso

6、fmiR-499ainhepatomacells.［Keywords］hepatitisBvirus;miR-499a;CFLAR;hepatomacells.SupportedbytheNaturalScienceFoundationProjectofCQCSTC(2010BB5359).Correspondingauthor:TangHua(Tel:86-23-68486780,E-mail:tanghua86162003@aliyun.com)［基金项目］重庆市自然科学基金（2010BB5359）［通信作者］汤华，E-mail:tanghua86162003@al

7、iyun.com肝细胞肝癌（HCC）是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一，HBV感染是HCC发生的主要致病因素，但是HBV影响HCC发生发展的机制尚不是很清楚。microRNA(miRNA)一类长度为20～25个核苷酸，广泛存在于真核生物中的单链非编码小分子RNA，通过与miRNA序列特异性的碱基互补配对调控基因的表达［1］。miRNA表达水平的异常与人类肿瘤密切相关，近年来许多研究证明，miRNA广泛参与细胞发育的各个阶段中，包括细胞的增殖、凋亡和分化等［2-5］，有研究证实miR-122，miR-21、miR-101等miRNA与HCC的