db22t 2274-2015 金针菇中多糖的测定 苯酚-硫酸法

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1、ICS67.080B04备案号：44994-2015DB22吉林省地方标准DB22/T2274—2015金针菇中多糖的测定苯酚-硫酸法Determinationofpolysaccharideforneedlemushroom-phenol-sulfuricacidmethod2015-02-01发布2015-03-01实施吉林省质量技术监督局发布DB22/T2274—2015前言本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2001给出的规则起草。本标准由吉林省农业委员会提出并归口。本标准起草单位：吉林农业大学。本标准主要起草人：宋慧、李雨

2、婷、王健、吴雷、郭志欣、金周雨、郭超、杨雪、王岩、张赫。IDB22/T2274—2015金针菇中多糖的测定苯酚-硫酸法1范围本标准规定了金针菇中水溶性多糖含量苯酚-硫酸测定方法。本标准适用于金针菇子实体（干品、鲜品）中水溶性多糖含量的测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T15674-2009食用菌中粗脂肪含量的测定NY/T1676-2008食用菌中粗多糖含量的测定3

3、术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1水溶性多糖Water-solublepolysaccharide一类能够溶解或者溶胀于H2O中形成水溶液或分散体系的多糖。4原理试料经热水提取，通过透析膜透析，得到的多糖在浓硫酸作用下，先水解成单糖，并脱水生成糖醛衍生物，与苯酚生成橙黄色物质，在490nm处有最大吸收，吸光度值与多糖含量呈正比。5试剂与材料除非有特殊说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的三级水。5.1硫酸（H2SO4），ρ=1.84g/mL。5.295%乙醇（CH3CH2OH）。5.3苯酚（C6H6O），重蒸馏，将苯酚置于80

4、℃的水浴中溶解，然后将一定量的苯酚移至蒸馏烧瓶中。放入玻璃珠数粒，于182℃蒸馏，弃去最初2min～3min蒸馏液，收集随后的蒸馏液，待冷却后备用。警告--苯酚蒸汽有腐蚀性和毒性，重蒸馏需在通风橱内进行。5.4葡萄糖（C6H12O6）标准品(CAS:50-99-7)。5.5800g/L苯酚溶液：量取80g重蒸馏苯酚（5.3）于100mL烧杯中，加水溶解，定容至100mL，于棕色磨口瓶中，4℃冰箱，贮存期为2个月。1DB22/T2274—20155.650g/L苯酚溶液：将5mL800g/L苯酚溶液（5.5）稀释为总体积80mL混合液，现用现配。5.7葡萄糖

5、标准储备液：称取0.1000g葡萄糖于100mL烧杯中，加水溶解，定容至100mL，此溶液浓度为1.0g/L，于磨口瓶中，置4℃冰箱，贮存期为15天。5.8葡萄糖标准工作液：将5mL葡萄糖标准储备液（5.7）稀释为总体积50mL混合液，现用现配；5.9透析袋：D36mm，截留分子量6000～8000Da。5.10标准筛：20目，0.9mm。6仪器设备6.1紫外-可见分光光度计，1cm比色杯。6.2分析天平，感量0.0001g。6.3离心机，转速在4000rpm以上，离心管容量≥50mL。6.4超声波提取器。6.5干燥箱，RT+10℃～250℃。7试样的制备

6、应按照GB/T15674-2009中6.2的要求进行制备。7.1干样：将试样剪成小块，于80℃干燥箱中烘至发脆后置于干燥器内冷却，立即粉碎。粉碎样品过孔径为0.9mm的筛。未能过筛的部分再次粉碎或经研磨后再过筛，直至全部样品过筛为止，过筛后的样品全部混匀后装入清洁的广口瓶内密封保存，备用。7.2鲜样：将试样用手撕或刀切成小块，50℃鼓风干燥6h以上，待样品半干后逐步提高温度至80℃，烘至发脆后置于干燥器内冷却，立即粉碎。其他操作同7.1。8分析步骤8.1提取应按照NY/T1676-2008中7.2的要求进行提取。称取1.0g粉碎过0.9mm孔径筛的试样（7

7、.1或7.2），精确到0.001g，置于50mL具塞离心管内。用5mL水浸润试样，缓慢加入20mL无水乙醇，充分振摇，使混合均匀，置超声提取器中超声提取30min。提取结束后，于4000rpm/min离心10min，弃去上清液。不溶物用10mL乙醇溶液洗涤、离心。用30mL水分次将上述不溶物全部转入具塞锥形瓶中，以无菌透气封口膜封口后，于沸水浴中提取2h。冷却至室温，过滤，滤液备用。8.2透析可以选择静止透析或流水透析方法。透析后，透析袋内溶液即为试料测定液。8.2.1静止透析：将滤液转移至长约15cm透析袋（5.9）中，封口。将透析袋放入装有蒸馏水的10

8、00mL烧杯中。4℃透析1小时后更换透析外液；继续透析2小时后更换