BJS 202201 食品中爱德万甜的测定

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食品补充检验方法犅犑犛２０２２０１食品中爱德万甜的测定２０２２０２０７发布国家市场监督管理总局发布

1犅犑犛２０２２０１食品中爱德万甜的测定１范围本方法规定了食品中爱德万甜的测定方法。本方法第一法为高效液相色谱串联质谱法，适用于饮料、酒类、焙烤食品、可可制品、巧克力和巧克力制品以及糖果、发酵乳和风味发酵乳、果冻、冷冻饮品、蛋制品、复合调味料中爱德万甜的测定。本方法第二法为高效液相色谱荧光检测法，适用于加工水果（水果干类、水果罐头、果酱、果泥、蜜饯凉果等）中爱德万甜的测定。２第一法高效液相色谱串联质谱法２．１原理试样中的爱德万甜用乙腈溶液提取，经离心取上清液加入Ｃ１８粉末净化后，用反相液相色谱分离、串联质谱正离子模式检测，外标法定量。２．２试剂和材料除另有说明外，所用试剂均为色谱纯，水为符合ＧＢ／Ｔ６６８２规定的一级水。２．２．１试剂２．２．１．１甲醇（ＣＨ３ＯＨ）。２．２．１．２乙腈（ＣＨ３ＣＮ）。２．２．１．３正己烷（Ｃ６Ｈ１４）。２．２．１．４甲酸（ＨＣＯＯＨ）。２．２．１．５氯化钠（ＮａＣｌ）：分析纯。２．２．２试剂配制２．２．２．１饱和氯化钠水溶液（常温１０℃～３０℃）：称取过量（＞３６ｇ）氯化钠（２．２．１．５）加入１００ｍＬ水溶解，溶液底部应有过量的氯化钠固体。２．２．２．２乙腈溶液（含氯化钠水溶液）：量取８００ｍＬ乙腈（２．２．１．２）和２００ｍＬ饱和氯化钠水溶液（２．２．２．１），混匀后静置，收集上层乙腈层备用。２．２．２．３乙腈溶液（含正己烷）：量取８００ｍＬ乙腈（２．２．１．２）和２００ｍＬ正己烷（２．２．１．３），混匀后静置，收集下层乙腈层备用。２．２．３标准品爱德万甜标准物质（Ｃ２４Ｈ３０Ｎ２Ｏ７·Ｈ２Ｏ，ＣＡＳ号７１４２２９２０６，相对分子质量４７６．５２）：经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。（相关信息见附录Ａ）２．２．４标准溶液配制２．２．４．１爱德万甜标准储备液：称取爱德万甜标准物质１０ｍｇ（精确至０．０１ｍｇ），于１０ｍＬ容量瓶，用１

2犅犑犛２０２２０１甲醇（２．２．１．１）溶解并稀释至刻度。４℃下避光保存，保存期为６个月。２．２．４．２标准中间溶液：吸取上述标准储备液（２．２．４．１）１．００ｍＬ于１００ｍＬ容量瓶中，用甲醇（２．２．１．１）稀释到刻度配制成质量浓度为１０．０μｇ／ｍＬ的标准中间溶液，４℃下避光保存，保存期为１个月。２．２．５材料２．２．５．１微孔滤膜：０．２２μｍ，有机相。２．２．５．２Ｃ１８吸附剂：粒径４０μｍ～６０μｍ。２．３仪器和设备２．３．１高效液相色谱串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ＥＳＩ）。２．３．２电子天平：感量分别为０．０１ｍｇ和０．０１ｇ。２．３．３涡漩混合器。２．３．４超声波清洗器。２．３．５恒温水浴振荡器。２．３．６离心机：转速不低于４０００ｒ／ｍｉｎ。２．３．７匀浆机。２．３．８高速粉碎机。２．４分析步骤２．４．１试样制备与保存２．４．１．１果冻、巧克力和巧克力制品以及糖果、冷冻饮品、焙烤食品、蛋制品、固体及半固体复合调味料经匀浆机或高速粉碎机捣碎后备用。除冷冻饮品（现用现制）外将样品置于样品瓶中，密封，标识后２℃～６℃下保存。２．４．１．２碳酸饮料倒入洁净烧杯中，超声３０ｍｉｎ去除溶解性二氧化碳后，存贮于样品瓶中，密封，标识后２℃～６℃下保存。２．４．２样品前处理２．４．２．１提取２．４．２．１．１冷冻饮品、复合调味料、蛋制品、酒类、果冻类食品称取２ｇ样品（精确至０．０１ｇ），置于５０ｍＬ聚丙烯离心管中，加入３ｍＬ水，涡漩振荡３０ｓ，加入２ｇＮａＣｌ（２．２．１．５）后，加入２０ｍＬ乙腈溶液（２．２．２．２），加入０．２ｍＬ甲酸（２．２．１．４），涡漩提取１ｍｉｎ，４０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，上清液待净化。２．４．２．１．２可可制品、巧克力和巧克力制品以及糖果（胶基糖果除外）、焙烤类食品称取２ｇ样品（精确至０．０１ｇ），置于５０ｍＬ聚丙烯离心管中，加入５ｍＬ水，６０℃水浴振荡１０ｍｉｎ后，涡漩振荡３０ｓ，加入２ｇＮａＣｌ（２．２．１．５），加入２０ｍＬ乙腈溶液（２．２．２．２），加入０．２ｍＬ甲酸（２．２．１．４），涡漩提取１ｍｉｎ，４０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，上清液待净化。２．４．２．１．３胶基糖果类食品称取１ｇ样品（精确至０．０１ｇ），置于５０ｍＬ聚丙烯离心管中，加入１０ｍＬ正己烷，超声提取２０ｍｉｎ，加入乙腈溶液（２．２．２．３）２０ｍＬ，涡漩提取１ｍｉｎ，４０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，取下层乙腈溶液，０．２２μｍ滤膜２

3犅犑犛２０２２０１过滤，待测。２．４．２．１．４风味发酵乳、饮料类食品称取１ｇ样品（精确至０．０１ｇ），置于１００ｍＬ聚丙烯离心管中，加入５ｍＬ水，涡漩振荡３０ｓ，加入２ｇＮａＣｌ（２．２．１．５）后，加入５０ｍＬ乙腈溶液（２．２．２．２），加入０．２ｍＬ甲酸（２．２．１．４），涡漩提取１ｍｉｎ，４０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，上清液待净化。２．４．２．２净化移取２．４．２．１．１、２．４．２．１．２和２．４．２．１．４待净化液２ｍＬ，转移至装有４０ｍｇＣ１８吸附剂（２．２．５．２）的离心管中，振摇２ｍｉｎ，以４０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，取１ｍＬ上层清液，０．２２μｍ滤膜过滤，待测。２．４．３基质匹配标准溶液的制备２．４．３．１空白样品基质溶液：取经质谱确认不含爱德万甜的与被测样相同基质的样品，按照２．４．２样品前处理方法制备。２．４．３．２基质匹配标准工作溶液：吸取适量的标准中间溶液（２．２．４．２），用空白样品基质溶液（２．４．３．１）配制成质量浓度为１．００μｇ／Ｌ、５．００μｇ／Ｌ、２０．０μｇ／Ｌ、５０．０μｇ／Ｌ、１００μｇ／Ｌ、２５０μｇ／Ｌ系列标准工作溶液，或者根据仪器响应与实际情况配制适当浓度范围的标准曲线，临用时配制。２．４．４仪器参考条件２．４．４．１液相色谱参考条件液相色谱参考条件如下：ａ）色谱柱：Ｃ１８柱，４．６ｍｍ×５０ｍｍ，２．７μｍ，或性能相当者；ｂ）流动相：Ａ相为水，Ｂ相为乙腈（２．２．１．２），梯度洗脱条件见表１；ｃ）流速：０．４ｍＬ／ｍｉｎ；ｄ）柱温：３０℃；ｅ）进样量：２μＬ。表１梯度洗脱条件时间／ｍｉｎＡ／％Ｂ／％０７５２５３７５２５６２０８０７２０８０７．１７５２５１１７５２５２．４．４．２质谱参考条件质谱参考条件如下：ａ）离子源：电喷雾离子源（ＥＳＩ）；ｂ）扫描方式：正离子扫描；３

4犅犑犛２０２２０１ｃ）检测方式：多反应离子监测（ＭＲＭ）；ｄ）脱溶剂气、锥孔气、碰撞气均为高纯氮气或其他合适气体；ｅ）喷雾电压、碰撞能等参数应优化至最优灵敏度；ｆ）质谱检测参数详见附录Ｂ。２．４．５空白试验除不加试样外，均按试样同法操作。２．４．６测定２．４．６．１标准曲线在仪器参考条件（２．４．４）下，将系列标准工作溶液（２．４．３．２）按浓度由低到高的顺序进行测定，得到相应的标准溶液的色谱峰面积，以基质匹配标准工作溶液的浓度为横坐标，以色谱峰的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。２．４．６．２定性确证试样中目标化合物色谱峰的保留时间与相应标准色谱峰的保留时间相比较，变化范围应在±２．５％之内。目标化合物的质谱定性离子必须出现，至少应包括一个母离子和两个子离子，而且同一检测批次，样品中目标化合物的定量离子和定性离子的相对丰度比与浓度相当的标准溶液相比，其允许的相对偏差不超过表２规定的范围。表２定性确定时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度犽／％犽＞５０２０＜犽≤５０１０＜犽≤２０犽≤１０允许的相对偏差／％±２０±２５±３０±５０２．４．６．３定量测定试样中待测物的响应值应在标准曲线的线性范围内，若含量超出线性范围，应使用空白基质提取液将试样稀释后上机测定。基质匹配标准工作溶液的高效液相色谱串联质谱ＭＲＭ色谱图见附录Ｃ中图Ｃ．１。２．５结果计算试样中爱德万甜含量按式（１）计算：犡＝ρ×犞犿×犳…………………………（１）式中：犡———试样中待测组分的含量，单位为微克每千克（μｇ／ｋｇ）；ρ———试样溶液中待测组分的质量浓度，单位为微克每升（μｇ／Ｌ）；犞———试样提取液体积，单位为毫升（ｍＬ）；犳———试样制备过程中的稀释倍数；犿———称样量，单位为克（ｇ）。计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，计算结果保留三位有效数４

5犅犑犛２０２２０１字，计算结果应扣除空白值。２．６方法灵敏度、准确度和精密度２．６．１灵敏度数据见表３。表３不同食品基质中爱德万甜测定的检出限和定量限食品类别称样量／ｇ提取液体积／ｍＬ进样量／μＬ检出限／（μｇ／ｋｇ）定量限／（μｇ／ｋｇ）复合调味料，冷冻饮品，可可制品、巧克力和巧克力制品以及糖果（胶基糖果除外），果冻，焙烤２２０２３．０１０．０食品，酒类，蛋制品胶基糖果１２０２６．０２０．０饮料，发酵乳和风味发酵乳１５０２１５．０５０．０２．６．２准确度本方法在１０μｇ／ｋｇ～６０００μｇ／ｋｇ添加浓度范围内，回收率为８０％～１１０％。２．６．３精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差不得超过算术平均值的１５％。３第二法高效液相色谱荧光检测法３．１原理试样中的爱德万甜用水溶液或乙腈／水溶液提取，在离心、稀释、过滤后经反相液相色谱分离、荧光检测器检测，外标法定量。３．２试剂和材料除另有说明外，在分析中仅使用分析纯试剂和ＧＢ／Ｔ６６８２中规定的一级水。３．２．１试剂３．２．１．１甲醇（ＣＨ３ＯＨ）：色谱纯。３．２．１．２乙腈（ＣＨ３ＣＮ）：色谱纯。３．２．１．３氯化钠（ＮａＣｌ）。３．２．２试剂配制３．２．２．１饱和氯化钠水溶液（常温１０℃～３０℃）：称取过量（＞３６ｇ）氯化钠（３．２．１．３）加入１００ｍＬ水溶解，溶液底部应有过量的氯化钠固体。３．２．２．２乙腈溶液（含氯化钠水溶液）：量取８００ｍＬ乙腈（３．２．１．２）加入到２００ｍＬ饱和氯化钠水溶液（３．２．２．１）中，混匀后静置，收集上层乙腈层备用。５

6犅犑犛２０２２０１３．２．２．３２０％乙腈溶液：量取２００ｍＬ乙腈（３．２．１．２）加入８００ｍＬ水中，混匀备用。３．２．３标准品爱德万甜标准物质（Ｃ２４Ｈ３０Ｎ２Ｏ７·Ｈ２Ｏ，ＣＡＳ号７１４２２９２０６，相对分子质量４７６．５２）：经国家认证并授予标准物质证书的标准物质（相关信息见附录Ａ）。３．２．４标准溶液配制３．２．４．１标准储备液（１．０ｍｇ／ｍＬ）：称取爱德万甜标准物质１０ｍｇ（精确至０．０１ｍｇ），于１０ｍＬ容量瓶，用甲醇（３．２．１．１）溶解并稀释至刻度。４℃下避光保存，保存期为６个月。３．２．４．２标准中间溶液：分别吸取标准储备液（３．２．４．１）１．００ｍＬ于１００ｍＬ容量瓶中，用甲醇（３．２．１．１）稀释到刻度配制成质量浓度为１０．０μｇ／ｍＬ的标准中间溶液，４℃下避光保存，保存期为１个月。３．２．４．３标准工作溶液：吸取适量的标准中间溶液（３．２．４．２），用２０％乙腈溶液（３．２．２．３）配制成质量浓度为０．０５ｍｇ／Ｌ、０．１ｍｇ／Ｌ、０．５ｍｇ／Ｌ、１ｍｇ／Ｌ、２ｍｇ／Ｌ、５ｍｇ／Ｌ系列标准工作溶液，或者根据仪器响应与实际情况配制适当浓度范围的标准曲线，临用时配制。３．２．５材料微孔滤膜：０．２２μｍ，有机相。３．３仪器和设备３．３．１液相色谱仪：配有荧光检测器。３．３．２天平：感量０．０１ｍｇ和０．０１ｇ。３．３．３涡漩混合器。３．３．４恒温水浴振荡器。３．３．５离心机：转速不低于４０００ｒ／ｍｉｎ。３．３．６匀浆机。３．３．７高速粉碎机。３．４分析步骤３．４．１试样制备水果干类、水果罐头、蜜饯凉果等经匀浆机或高速粉碎机粉碎后备用。３．４．２提取３．４．２．１水果罐头称取１ｇ样品（精确至０．０１ｇ），置于１００ｍＬ聚丙烯离心管中，加入１２．５ｍＬ乙腈（３．２．１．２），涡漩混匀，加入１０ｍＬ水，涡漩振荡３０ｓ，４０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ后，将上层清液转移至２５ｍＬ容量瓶中，用水定容，０．２２μｍ滤膜过滤，待测。３．４．２．２水果干类、蜜饯凉果中的果糕类称取１ｇ样品（精确至０．０１ｇ），置于５０ｍＬ聚丙烯离心管中，加入２０ｍＬ水，８０℃水浴加热１５ｍｉｎ，涡漩振荡３０ｓ，冷却至室温，４０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ后，将上层清液转移到５０ｍＬ容量瓶中，用水定容，０．２２μｍ滤膜过滤，待测。６

7犅犑犛２０２２０１３．４．２．３果酱、果泥、除果糕类以外的蜜饯凉果称取１ｇ样品（精确至０．０１ｇ），置于１００ｍＬ聚丙烯离心管中，加入２０ｍＬ水，其中除果糕类以外的蜜饯凉果需经８０℃水浴加热１５ｍｉｎ，冷却后加入１０ｇＮａＣｌ（３．２．１．３），加５０ｍＬ乙腈溶液（３．２．２．２），涡漩振荡３０ｓ，４０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ后，取１ｍＬ上层清液，０．２２μｍ滤膜过滤，待测。３．４．３液相色谱参考条件液相色谱参考条件如下：ａ）色谱柱：Ｃ１８柱，４．６ｍｍ×１５０ｍｍ，５μｍ，或性能相当者；ｂ）流动相：Ａ相为水，Ｂ相为乙腈，梯度洗脱条件见表４；表４梯度洗脱条件时间／ｍｉｎＡ／％Ｂ／％０９０１０１９０１０８７０３０１４７０３０１４．１１０９０１５１０９０１７９０１０２０９０１０ｃ）流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ；ｄ）柱温：３０℃；ｅ）进样体积：１０μＬ；ｆ）检测波长：激发波长２３０ｎｍ，发射波长３１２ｎｍ；ｇ）液相色谱图：见附录Ｄ中图Ｄ．１。３．４．４测定３．４．４．１标准曲线用系列标准工作溶液（３．２．４．３）分别按仪器参考条件（３．４．３）进行测定，得到相应的标准溶液的色谱峰面积，以标准工作溶液的浓度为横坐标，以色谱峰的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。３．４．４．２试样溶液的测定将处理好的试液和标准溶液，分别按仪器参考条件进行测定。根据保留时间定性，外标峰面积法定量。以标准工作溶液的浓度为横坐标，以色谱峰的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。根据标准曲线得到试液中组分的浓度，平行测定次数不少于两次。标准物质液相色谱图见图Ｄ．１。３．５结果计算试样中爱德万甜含量按式（２）计算：犡＝ρ×犿犞××１１００００００…………………………（２）７

8犅犑犛２０２２０１式中：犡———试样中待测组分的含量，单位为毫克每千克（ｍｇ／ｋｇ）；ρ———由标准曲线得出的样液中爱德万甜的质量浓度，单位为毫克每升（ｍｇ／Ｌ）；犞———试样溶液定容体积或试样提取液体积，单位为毫升（ｍＬ）；犿———试样称取的质量，单位为克（ｇ）。计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，计算结果保留三位有效数字。３．６方法灵敏度、准确度、精密度３．６．１灵敏度数据见表５。表５加工水果基质中爱德万甜测定的检出限和定量限定容体积或提取液食品类别称样量／ｇ进样量／μＬ检出限／（ｍｇ／ｋｇ）定量限／（ｍｇ／ｋｇ）体积／ｍＬ水果罐头１２５１００．５１．５加工水果果酱、果泥、水果干类１５０１０１．０３．０以及蜜饯凉果３．６．２准确度本方法在１．５ｍｇ／ｋｇ～１２０ｍｇ／ｋｇ添加浓度范围内，回收率为８０％～１１０％。３．６．３精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的１５％。８

9犅犑犛２０２２０１附录犃（资料性）爱德万甜相关信息表爱德万甜名称、ＣＡＳ号、分子式、相对分子质量及结构式见表Ａ．１。表犃．１爱德万甜名称、犆犃犛号、分子式、相对分子质量及结构式项目内容中文名称爱德万甜ａ英文名称犖［犖［３（３ｈｙｄｒｏｘｙ４ｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）ｐｒｏｐｙｌ］犔αａｓｐａｒｔｙｌ］犔ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ１ｍｅｔｈｙｌｅｓｔｅｒ化学命名犖｛犖［３（３羟基４甲氧基苯基）丙基］犔犪天冬氨酰｝犔苯丙氨酸１甲酯ＣＡＳ号７１４２２９２０６分子式Ｃ２４Ｈ３０Ｎ２Ｏ７·Ｈ２Ｏ相对分子质量４７６．５２结构式ａ引用于国家卫生计生委食品安全标准与监测评估司２０１７年第８号公告《关于爱德万甜等６种食品添加剂新品种、环己基氨基磺酸钠（又名甜蜜素）等６种食品添加剂扩大用量和使用范围的公告》。９

10犅犑犛２０２２０１附录犅（资料性）参考质谱参数参考质谱参数如下：ａ）离子源：电喷雾离子源；ｂ）扫描方式：正离子扫描（ＥＳＩ＋）；ｃ）检测方式：多反应监测（ＭＲＭ）；ｄ）离子化电压（ＩＳ）：５５００Ｖ；ｅ）雾化气压力（Ｇａｓ１）：３４５ｋＰａ；ｆ）辅助气压力（Ｇａｓ２）：３４５ｋＰａ；ｇ）气帘气压力（ＣＵＲ）：２４２ｋＰａ；ｈ）雾化温度（ＴＥＭ）：５００℃；ｉ）定性离子对、定量离子对及其他质谱参数见表Ｂ．１。表犅．１爱德万甜的定性离子对、定量离子对和质谱分析参数分析物离子对（犿／狕）去簇电压／Ｖ碰撞能量／ｅＶ入口电压／Ｖ出口电压／Ｖ４５９．２／１０２．０ａ１７０３２１０１３爱德万甜４５９．２／８４．０ｂ１７０４９１０１３４５９．２／２５２．２ｃ１７０２７１０１３ａ定量离子对。ｂ定性离子对。ｃ参考定性离子对，如检测过程中定性离子对遇到干扰，可增加参考定性离子对，增加定性的准确性。附录Ｂ所列参考质谱条件仅供参考，当采用不同质谱仪器时，仪器参数可能存在差异，测定前应将质谱参数优化到最佳。１０

11犅犑犛２０２２０１附录犆（资料性）参考质谱谱图参考质谱谱图见图Ｃ．１～图Ｃ．２。图犆．１爱德万甜定量离子对质量色谱图（１μ犵／犔）图犆．２爱德万甜定性离子对质量色谱图（１μ犵／犔）１１

12犅犑犛２０２２０１附录犇（资料性）参考液相色谱谱图参考液相色谱谱图见图Ｄ．１。图犇．１爱德万甜标准物质液相色谱图（０．５犿犵／犔）本方法负责起草单位：大连市食品检验检测院。本方法验证单位：沈阳海关技术中心、湖北省食品质量安全监督检验研究院、深圳海关食品检验检疫技术中心、南京海关动植物与食品检测中心、河北省药品医疗器械检验研究院、大连海洋大学、大连理工大学。本方法主要起草人：曲宝成、毛希琴、勇艳华、李海燕、姜俊、李鹏、刘怡君、刘畅、边海涛、赵洪霞、李莉。２１