BJS 202107 食品中酸性大红GR的测定

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食品补充检验方法犅犑犛２０２１０７食品中酸性大红犌犚的测定２０２１０７２８发布国家市场监督管理总局发布

1犅犑犛２０２１０７食品中酸性大红犌犚的测定１范围本方法规定了食品中酸性大红ＧＲ含量的高效液相色谱测定方法。本方法适用于水产干制品、辣椒制品和饮料中酸性大红ＧＲ含量的测定。２原理用乙醇氨水溶液提取样品中的酸性大红ＧＲ，利用聚酰胺吸附法进行净化，用反相液相色谱仪进行分析。根据保留时间定性，以峰面积外标法定量。３试剂和材料注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为ＧＢ／Ｔ６６８２规定的一级水。３．１试剂３．１．１无水乙醇（Ｃ２Ｈ５ＯＨ）。３．１．２石油醚：沸程３０℃～６０℃。３．１．３乙酸铵（ＣＨ３ＣＯＯＮＨ４）：色谱纯。３．１．４氨水（ＮＨ３·Ｈ２Ｏ）：含量（质量分数）２０％～２５％。３．１．５甲醇（ＣＨ３ＯＨ）：色谱纯。３．１．６甲酸（ＨＣＯＯＨ）。３．１．７柠檬酸（Ｃ６Ｈ８Ｏ７·Ｈ２Ｏ）。３．１．８乙酸（ＣＨ３ＣＯＯＨ）。３．２试剂配制３．２．１１０ｍｍｏｌ／Ｌ乙酸铵溶液：称取０．７７ｇ乙酸铵加水溶解至１Ｌ，经０．２２μｍ微孔滤膜过滤。３．２．２无水乙醇氨水水溶液（７∶２∶１，体积比）：量取无水乙醇７０ｍＬ，氨水２０ｍＬ，水１０ｍＬ，混匀。３．２．３甲醇甲酸溶液（６∶４，体积比）：量取甲醇６０ｍＬ，甲酸４０ｍＬ，混匀。３．２．４２００ｇ／Ｌ柠檬酸溶液：称取２０ｇ柠檬酸，加水至１００ｍＬ，溶解混匀。３．２．５甲醇氨水溶液（９∶１，体积比）：量取甲醇９０ｍＬ，氨水１０ｍＬ，混匀。３．２．６甲醇水溶液（６∶４，体积比）：量取甲醇６０ｍＬ，水４０ｍＬ，混匀。３．２．７ｐＨ４的水：水加柠檬酸溶液调ｐＨ到４。３．３标准品酸性大红ＧＲ（Ｃ２２Ｈ１４Ｎ４Ｎａ２Ｏ７Ｓ２，ＣＡＳ号：５４１３７５２，相对分子质量５５６．４８），纯度≥９８．０％，或采用经过国家认证并授予标准物质证书的标准物质。３．４标准溶液配制３．４．１酸性大红ＧＲ标准储备液（１．０ｍｇ／ｍＬ）：准确称取按其纯度折算后为１００％的酸性大红ＧＲ标准１

2犅犑犛２０２１０７品０．１ｇ（精确至０．１ｍｇ），置１００ｍＬ容量瓶中，用水溶解并定容，配成１．０ｍｇ／ｍＬ的标准储备液。贮存于４℃冰箱中，有效期６个月。３．４．２酸性大红ＧＲ标准工作液：吸取１ｍＬ标准储备液于１０ｍＬ容量瓶中，用水稀释成质量浓度为１００μｇ／ｍＬ的标准工作液。用甲醇水溶液（３．２．６）将标准工作液配制成０．２μｇ／ｍＬ、０．５μｇ／ｍＬ、１．０μｇ／ｍＬ、５．０μｇ／ｍＬ、１０．０μｇ／ｍＬ、５０．０μｇ／ｍＬ的标准系列工作溶液。临用时配制。３．５材料３．５．１聚酰胺吸附型固相萃取柱（５００ｍｇ／６ｍＬ）。３．５．２聚酰胺粉（尼龙６）：粒径７４μｍ～１４９μｍ（１００目～２００目）。３．５．３ｐＨ试纸：测量范围１～１４。３．５．４微孔滤膜：０．２２μｍ，聚四氟乙烯（ＰＴＦＥ）型。４仪器和设备４．１高效液相色谱仪：配有二极管阵列或紫外检测器。４．２分析天平：感量分别为０．００１ｇ和０．０００１ｇ。４．３离心机：转速≥８０００ｒ／ｍｉｎ。４．４氮吹仪。４．５固相萃取装置。４．６漏斗：Ｇ３垂融漏斗。５分析步骤５．１试样制备和保存取５００ｇ试样或所有试样（试样低于５００ｇ时）充分均质、混匀后粉碎，含二氧化碳的饮料类样品通过加热或超声去除二氧化碳。制备好的试样于４℃冰箱保存。５．２试样前处理５．２．１辣椒制品和水产干制品：准确称取制备好的试样２．０ｇ（精确至０．００１ｇ）于５０ｍＬ离心管中，向离心管中加入１０ｍＬ石油醚，涡漩振荡２ｍｉｎ后，８０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，弃去石油醚。重复上述步骤２次，将试样中的石油醚吹干。５．２．２饮料：准确称取制备好的试样２．０ｇ（精确至０．００１ｇ）于５０ｍＬ离心管中。５．３提取于５．２试样中加入无水乙醇氨水水（３．２．２）溶液１０ｍＬ，超声提取５ｍｉｎ，８０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，取上清液。重复上述步骤２次，合并提取液，于６０℃水浴下用氮气吹至５ｍＬ以下。用柠檬酸溶液（３．２．４）调节ｐＨ至３．０～４．０。５．４净化５．４．１聚酰胺固相萃取柱法先分别用５ｍＬ甲醇和５ｍＬ水活化固相萃取小柱（３．５．１），将５．３所述提取液全部转移至小柱上，分别用１０ｍＬ甲醇甲酸溶液（３．２．３）和１０ｍＬ水淋洗小柱，再用１０ｍＬ６０℃水冲洗柱体，负压抽干２

3犅犑犛２０２１０７５ｍｉｎ。最后用１０ｍＬ甲醇氨水（３．２．５）溶液进行洗脱。收集洗脱液，于６０℃水浴下用氮气吹近干，用甲醇水溶液（３．２．６）定容至５ｍＬ。注：上样和洗脱流速不大于３ｍＬ／ｍｉｎ。５．４．２聚酰胺粉吸附法将１ｇ聚酰胺粉加少许水调成糊状，倒入５．３所述提取液中，搅拌片刻，以Ｇ３垂融漏斗抽滤，用６０℃ｐＨ为４的水（３．２．７）洗涤３～５次，然后用甲醇甲酸溶液（３．２．３）洗涤３～５次，再用水洗至中性，用无水乙醇氨水水溶液（３．２．２）解吸３～５次，直至色素完全解吸，收集解吸液，加乙酸调成中性，蒸发至近干，加甲醇水溶液（３．２．６）溶解，定容至５ｍＬ。５．５液相色谱参考条件液相色谱参考条件如下：ａ）色谱柱：Ｃ１８柱（内径４．６ｍｍ×柱长２５０ｍｍ，粒径５μｍ），或性能相当者；ｂ）流动相：甲醇∶乙酸铵溶液（１０ｍｍｏｌ／Ｌ）＝６∶４，体积比；ｃ）流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ；ｄ）柱温：３５℃；ｅ）进样量：２０μＬ；ｆ）检测波长：５１２ｎｍ。５．６测定将处理好的试液和标准溶液，分别按仪器参考条件进行测定。根据保留时间定性，外标峰面积法定量。以标准工作液的浓度为横坐标，以色谱峰的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。根据标准曲线得到试液中组分的浓度，平行测定次数不少于两次。标准品液相色谱图参见附录Ａ。６结果计算结果按式（１）计算：犡＝ρ×犿犞××１１００００００…………………………（１）式中：犡———试样中酸性大红ＧＲ的含量，单位为毫克每千克（ｍｇ／ｋｇ）；ρ———由标准曲线得出的样液中酸性大红ＧＲ的质量浓度，单位为微克每毫升（μｇ／ｍＬ）；犞———试样溶液定容体积，单位为毫升（ｍＬ）；犿———试样称取的质量，单位为克（ｇ）。计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留两位有效数字。７精密度在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的１５％。８其他当称样量为２．０ｇ、定容体积为５ｍＬ时，本方法检出限为０．５ｍｇ／ｋｇ，定量限为１．５ｍｇ／ｋｇ。３

4犅犑犛２０２１０７附录犃（资料性）酸性大红犌犚标准溶液液相色谱图酸性大红ＧＲ标准溶液色谱图见图Ａ．１。图犃．１酸性大红犌犚标准溶液色谱图（保留时间４．１４犿犻狀）本方法负责起草单位：江苏省食品药品监督检验研究院。本方法验证单位：南京市食品药品监督检验院、江苏省疾病预防控制中心、徐州市质量技术监督综合检验检测中心、河北省食品检验研究院、山东省食品药品检验研究院。本方法主要起草人：高惠敏、颜春荣、徐春祥、张征、孙小杰、孙晨、王波、曹梅荣、武传香。４