最新心理应激性失眠对大鼠脑组织P物质表达的影响PPT课件.ppt

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1、心理应激性失眠对大鼠脑组织P物质表达的影响一、目的和要求1.了解心理应激性失眠模型复制方法；2.掌握脑立体定位技术及睡眠时相的记录方法；3.观察睡眠时相和睡眠结构，分析其意义；4.观察心理应激性失眠对大鼠海马神经元细胞P物质表达的影响。原理1操作步骤3材料2二、内容材料动物：大鼠器材：手术刀剪、镊子、血管钳、螺丝钉、电焊、Leica2135切片机、Nikon光学显微镜、SN-2型脑立体定位仪、ND-828八道脑电图仪。试剂：一抗为兔抗鼠抗SP、二抗为羊抗兔IgG血清、DAB显色试剂盒。2原理1操作步骤3材料2二、内容操作步骤3动物模型建立取材免疫组织化学染色手术睡眠时相记录手术麻醉脑立体定

2、位固定安装铜质镀金螺钉插入银丝电极牙科水泥固定术后休息1周脑立体定位仪大鼠制动模具12大鼠置于束缚制动筒内,移动插片逐步缩小空间每日一次，每日开始及持续时间不同制动期间禁食禁水第一天制动4h，以后每天增加半小时模型的建立睡眠描记及分析记录电极通过微型插座连接到八道脑电仪上，同步记录脑电和肌电活动，每次描记从10：00开始，连续记录6h。以30s为一分段时间，将睡眠觉醒周期分为：NREMsREMs取材于造模第15天，大鼠禁食12h，水合氯醛麻醉后剪开其前胸壁、心包，找到主动脉。在升主动脉处插管，剪开右心耳，快速灌注生理盐水250ml，直至流出的液体澄清透亮无血为止。继之快速灌注4%多聚甲醛2

3、50ml，直至大鼠肢体无刺激症状为止。迅速开颅取脑,置入4%多聚甲醛24h，梯度酒精脱水，二甲苯透明，常规石蜡包埋切片。(1)石蜡切片常规脱蜡至水。(2)30%H2O21份+蒸馏水10份混合，室温10分钟以灭活内源性酶。(3)PBS洗5分钟×3次。(4)抗原修复对于大部分指标，可以直接进入下一步；对于难以显示的抗原，可以将切片浸入0.01M枸橼酸盐缓冲液（PH6.0）电炉或微波炉加热至沸腾后断电，间隔5-10分钟后，反复1-2次，冷却后PBS洗5分钟×3次。(5)滴加正常山羊血清封闭液，室温30分钟。甩去多余液体，不洗。(6)滴加适当稀释的一抗（兔抗小鼠），37℃1-2小时或4℃过夜。免疫

4、组化染色过程(7)PBS洗5分钟×3次。(8)滴加生物素化二抗（羊抗兔），37℃1小时。(9)PBS洗5分钟×3次。(10)滴加试剂SABC，37℃1小时。(11)PBS洗5分钟×3次。(12)DAB显色：使用DAB显色试剂盒。取1毫升蒸馏水，加试剂盒A，B，C试剂各1滴，混匀后滴加至切片。室温显色，镜下控制反应时间，一般在5-10分钟之间。也可以自配显影剂显色。蒸馏水洗涤。(13)苏木素轻度复染。脱水，透明，封片。显微镜观察。(14)结果阳性细胞呈棕黄色或棕褐色。免疫组化染色过程三、实验结果表1两组大鼠wake比例（％）Tab1percentageofwakefulnessineachg

5、roup（％）组别1d3d5d7d10d15d对照组模型组32.99±3.7837.87±7.2033.44±8.5844.02±5.17*35.86±10.341.64±4.24*33.02±5.1342.91±8.84**36.56±5.8339.47±4.0836.47±5.7039.22±7.51组别1d3d5d7d10d15d对照组模型组55.26±7.8755.65±5.6555.64±4.7847.06±4.46*52.93±4.6751.48±5.8956.74±3.4550.08±5.65*55.17±4.6554.04±7.4355.89±7.1353.70±8.34表

6、2两组大鼠NREMs比例（％）Tab2percentageofNREMsineachgroup（％）组别1d3d5d7d10d15d对照组模型组11.76±2.016.47±1.77**11.76±2.019.32±2.9711.22±3.906.88±2.56**10.24±3.637.01±3.19*8.28±1.816.49±3.827.64±2.997.08±2.67表3两组大鼠REMs比例（％）Tab3percentageofREMsineachgroup（％）注：模型组与对照组相比，*p<0.05，**p<0.01。图A对照组×400图B模型组×400FigAnormalgro

7、up×400FigBmodelgroup×400AB大鼠海马SP阳性细胞简述心理应激性失眠导致SP表达变化的可能机制及意义。免疫组化染色过程中注意应什么?Thankyouverymuch!护士行为“十个一点”问候多一点、言语暖一点、查房勤一点、观察细一点、行为轻一点、业务精一点、帮助广一点、亲情浓一点、仪表美一点、微笑甜一点急性中毒护理部急性中毒指毒品走私案物经人体食道、气道、皮肤、血脉侵入体内，致使气血失调，津液、水精