基于双向电泳技术的针刺对失眠模型大鼠脑组织蛋白差异表达的影响

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1、河南中医学院２０１3届硕士研究生学位论文基于双向电泳技术的针刺对失眠模型大鼠脑组织蛋白差异表达的影响研究生姓名：佘悦导师：高希言教授指导组成员：王培育讲师马巧琳讲师赵欣纪副教授学科、专业：针灸推拿学所属院、系：针灸推拿学院中国·郑州２０１3年４月３０日硕士学位论文原创性声明本人所呈交的硕士学位论文，是在导师高希言教授的指导下，独立进行科学研究工作所取得的成果。除文中已特别加以注明引用的内容外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。特此声明。论文作者（签名）：年月日

2、硕士学位论文使用授权声明本人已完全了解河南中医学院有关保留、使用硕士学位论文的相关规定，同意学校保留或向国家有关部门、机构送交本学位论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权河南中医学院可以将本论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存、汇编本论文（注：保密论文在解密后适用本授权声明）。特此声明。论文作者（签名）：导师（签名）：年月日年月日目录摘要„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„1前言„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„5实验方法„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„7实验一

3、：大鼠失眠模型制备及大鼠脑组织提取„„„„„„„„„„„„„7实验二：失眠模型大鼠脑组织总蛋白质提取„„„„„„„„„„„„„„8实验三：Bradford法测定蛋白质含量„„„„„„„„„„„„„„„„10实验四：一向PH梯度等电聚焦电泳„„„„„„„„„„„„„„„„„11实验五：二向垂直平板SDS聚丙烯酰胺均一凝胶电泳的制胶与灌胶„„„14实验六：二向SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳„„„„„„„„„„„„„„„16实验七：考马斯亮蓝G-250染色„„„„„„„„„„„„„„„„„„18实验八：蛋白图像采集与分析„„„„„„„„„„„„„„„„„„„19实验结果„„„„„„„„„„„„„„„„„

4、„„„„„„„„„„„„211大鼠行为学改变„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„212脑组织总蛋白浓度„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„213双向凝胶电泳图谱„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„224凝胶图谱分析„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„25理论探讨„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„281祖国医学对失眠的认识„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„282现代医学对失眠的认识„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„313课题立论依据„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„334实验结果分析„„„„„„

5、„„„„„„„„„„„„„„„„„„„375本课题存在的不足和进一步研究的思路„„„„„„„„„„„„„„39结论„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„41致谢„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„42参考文献„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„43附录„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„45附录1图片„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„45附录2文献综述„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„51附录3在校期间论文论著和科研情况„„„„„„„„„„„„„„„67摘要摘要目的：利用

6、蛋白质组学方法，通过双向电泳分离技术，构建失眠模型大鼠脑组织蛋白质差异表达图谱，寻找针刺提高睡眠质量的相关蛋白，比较各组间蛋白质的表达差异，为探讨针刺治疗失眠的作用机制提供实验依据。方法：1.选用150只清洁级雄性SD大鼠，随机分为五组，正常饲养1周后，各组大鼠按以下方法进行处理：空白对照组不予任何处理；正常捆绑对照组每日行抓取处理，连续9天；正常针刺治疗组每日行抓取处理，第3天开始针刺，连续针刺7天；模型对照组每日上午腹腔注射对氯苯丙氨酸混悬液lml/100g，连续注射2日，第3天开始只抓取，不予针刺，连续抓取7天；模型针刺治疗组每日上午腹腔注射对氯苯丙氨酸混悬液lml/100g，连续注射2

7、日，第3天开始抓取并针刺，连续针刺7天；2.造模结束后将大鼠断头，取出脑组织，分别提取五组大鼠全脑总蛋白，测定其蛋白浓度；3.采用双向电泳技术纯化分离出大鼠脑组织内的蛋白质，然后进行考马斯亮兰染色，扫描凝胶图像并获取蛋白质双向凝胶电泳图谱；4.应用2-DE图谱分析软件“ImageMaster2DPlatinum”对双向凝胶电泳图谱进行分析，寻找出五组间差异表达的蛋白质。结果：1.获得5组重复性较好