最新实验7-ACE基因多态性分析ppt课件.ppt

《最新实验7-ACE基因多态性分析ppt课件.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、实验7-ACE基因多态性分析实验概要实验目的实验原理实验操作结果和分析注意事项思考题一、实验目的从微量来源的组织细胞中抽提基因组DNAPCR法分析基因多态性分析真核生物基因组中非编码序列多于编码序列基因组编码序列非编码序列调控序列重复序列串联重复序列（串联排列：大卫星、小卫星、微卫星）散在重复序列（散在分布：Alu家族）重复单位长度：1-几千bp；重复次数：几次-几百万次Alu家族重复单位：300bp左右；130+31+130bp具Alu酶切位点30-50万次功能：基因调控Alu元件的插入、删除和重组与许多先天性遗传疾病和癌症相关淋巴细胞染色体：绿色为Alu序列ACE基因分析的理论

2、基础ACE基因第16内含子存在一段长度为287bp（Alu序列）的插入/缺失（I/D）多态性片段，I/D多态性与血液ACE水平有明确关系，DD型ACE水平最高，ID次之，II最低。左室肥大患者中DD型频率明显增高。实验原理以DNA为模板，ACE基因特异的引物序列位于287bp插入/缺失片段的两侧进行PCR扩增，故II型扩增片段长度约为490bp，DD型扩增片段长度约为190bp，ID型扩增片段为２个，分别为190bp和490bp。根据PCR扩增片段的大小可进行多态性分析。插入片段插入型（I型）缺失型（D型）490bp190bp三、操作步骤基因组DNA抽提PCR反应琼脂糖凝胶电泳检测

3、1.基因组DNA抽提溶液Ⅰ10ml漱口20秒收集漱口水；3000g×5min×RT，弃上清；溶液Ⅱ250μl重悬沉淀；3000g×1min，弃上清；溶液Ⅲ250μl重悬沉淀，振荡10秒；（变性）转至1.5ml离心管，99℃×5min；加溶液IV50μl振荡5秒；（中和）3000g×5min，上清转移至新0.5ml离心管，取5ul用于PCR.(4%蔗糖溶液)(NaOH)(Tris-HCl)2.PCR反应取消毒的0.2ml离心管，加入下列成分：2×PCRBuffermix10μlDNA模板5μl引物混合物(10μMeach)2μlddH2O3μl总体系20μl扩增程序为：94℃变性5m

4、in94℃变性30s55℃复性30s72℃延伸40s72℃延伸10min,4℃保存35个循环3.琼脂糖电泳检测制备1.5％琼脂糖凝胶点样，电泳紫外灯下观察结果四、实验结果：ACE基因多态性电泳图2k1k750bp500bp250bp100bp五、注意事项1.清洁口腔，充分漱口。2.裂解细胞后震荡时间不易长，以免DNA断裂。六、思考题1.何为基因多态性？2.基因多态性的临床意义有哪些？基建投资控制交流1投资控制的概念投资控制管理的原则2投资控制策略31、投资控制的概念项目投资是指进行项目工程建设花费的全部投资，由设备购置费、建筑工程费、安装工程费和其它费用组成。包括静态投资和动态投资

5、。项目投资控制是在项目的决策阶段、设计阶段、建设阶段，采取一定的方法和措施将工程投资控制在合理的范围内，随时纠正发生的偏差，以保证项目投资控制目标的实现。投资控制应贯穿工程建设全过程：投资决策阶段设计阶段采购阶段建设实施阶段结算阶段1、投资控制的概念基本建设期间的投资控制重点在技术方案上制止浪费在采购上控制价格严控管理费用成本投资控制的宗旨以提高企业市场竞争力机组整个寿命期内的效益最大21投资控制的概念投资控制管理的原则投资控制策略3一标准、两环节、三制2、投资控制管理原则一标准：建“盈利型企业”作为投资控制的标准以项目所在地标杆电价和公司规定的资本金回报率反算的投资额，该投资作为

6、投资估算和初设概算的上限。以行业基准收益率和投资回收期评估项目的经济性和投产后市场竞争条件，确保建设盈利企业两环节：设计环节和市场环节设计环节：①设计技术管理②施工组织设计管理市场环节：①产品的市场环节②采购的市场环节三制：工程费用－－招标制管理费用－－预算制结算费用－－审计制2、投资控制管理原则投资控制责任分工工程部：重点抓好设计优化，管控设计变更、零星工程委托和工程量签证；计划部：严控施工及服务类项目采购关和合同结算关；物资部：严控设备及材料类采购关，确保设备到货满足工程建设需求；财务部：利用多种融资渠道和手段降低建贷利息，利用相关政策争取税收优惠；办公室和全体部门：控制四项管

7、理费用。投资控制不是一件单一或例外的工作，更不是一句口号。要求全体人员具有投资控制的意识，并将其落实到具体日常工作中，时时处处或点点滴滴，从而达到全员投资控制的状态。投资控制的概念1投资控制管理的原则2投资控制策略3结算阶段控制重点3.4设计阶段控制重点3.1施工阶段控制重点3.3采购阶段控制重点3.2其他3.5通过可研评审、初设评审、司令图评审及各专题评审环节，充分借鉴外部专业技术力量，进行设计优化工作，从设计源头控制工程投资；按照“简约实用、控制冗余”的原则进行设