最新乙肝病毒DNA的实验室检测教学讲义ppt.ppt

《最新乙肝病毒DNA的实验室检测教学讲义ppt.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、进入夏天，少不了一个热字当头，电扇空调陆续登场，每逢此时，总会想起那一把蒲扇。蒲扇，是记忆中的农村，夏季经常用的一件物品。　　记忆中的故乡，每逢进入夏天，集市上最常见的便是蒲扇、凉席，不论男女老少，个个手持一把，忽闪忽闪个不停，嘴里叨叨着“怎么这么热”，于是三五成群，聚在大树下，或站着，或随即坐在石头上，手持那把扇子，边唠嗑边乘凉。孩子们却在周围跑跑跳跳，热得满头大汗，不时听到“强子，别跑了，快来我给你扇扇”。孩子们才不听这一套，跑个没完，直到累气喘吁吁，这才一跑一踮地围过了，这时母亲总是，好似生气的样子，边扇边

2、训，“你看热的，跑什么？”此时这把蒲扇，是那么凉快，那么的温馨幸福，有母亲的味道！　　蒲扇是中国传统工艺品，在我国已有三千年多年的历史。取材于棕榈树，制作简单，方便携带，且蒲扇的表面光滑，因而，古人常会在上面作画。古有棕扇、葵扇、蒲扇、蕉扇诸名，实即今日的蒲扇，江浙称之为芭蕉扇。六七十年代，人们最常用的就是这种，似圆非圆，轻巧又便宜的蒲扇。　　蒲扇流传至今，我的记忆中，它跨越了半个世纪，也走过了我们的半个人生的轨迹，携带着特有的念想，一年年，一天天，流向长长的时间隧道，袅乙肝病毒DNA的实验室检测1、荧光定量PC

3、R技术2、乙肝病毒的感染3、HBV-DNA与临床荧光定量PCR技术延伸5’3’5’3’5’3’5’3’3’5’3’TaqTaq5’5’重复退火5’3’5’3’5’3’5’3’5’5’3’3’5’3’5’3’循环24个拷贝循环38个拷贝5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’3’5’5’3’5’3’5’3’5’3’荧光定量PCR原理插入染料法SYBRGreenI杂交探针法(最常用)TaqManTaqMan探针5’5’3’3’d.NTPsTaq酶Primers5’3’5

4、’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’反应体系变性5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’Taql5’3’RQProbe5’3’RQ5’3’5’3’5’3’RQ退火5’3’1.链取代Taq3’QR5’5’3’3’QTaqR5’2.水解3.聚合5’3’QTaqR3’5’4.检测荧光5’3’3’QTaqR5’l乙肝病毒的感染乙肝病毒的感染（一）乙型肝炎病毒结构及特点HBsAg：是HBV感染的主要标志HBsAb：保护性抗体HBcAg：仅存于感染的肝细胞核内，一般不存在于血循环中HBcAb:非保护

5、性抗体，HBcAb-IgM提示HBV处于复制状态HBeAg：HBV复制及强感染性的指标HBeAb：有一定的保护作用，预后良好乙肝病毒的感染（二）HBV-DNA与“两对半”1.“两对半”：机体的免疫反应状态；2.“携带者”、“大三阳”、“小三阳”等免疫学指标不能反应体内病毒复制水平与感染程度。FQ-PCR：检测的是HBV本身的遗传物质—DNA，是病毒存在和复制的最可靠、最直接的指标。HBsAg(－)HBV-DNA(＋)HBeAg(－)HBV-DNA(＋)3.血清学指标(－)不能排除HBV感染。乙肝病毒的感染5.HB

6、eAg阳性标本HBVDNA检出率90％左右HBeAg与HBVDNA有着良好的相关性4.也可能出现HBsAg(＋)，HBV-DNA(－)。乙肝病毒的感染乙肝病毒的感染慢性HBV感染分期及相关实验室检测指标鲁凤民，庄辉，乙型肝炎实验室诊断研究进展2009HBV-DNA与临床HBVDNA检测的临床意义HBVDNA是HBV存在最直接的依据HBVDNA是HBV复制的标志HBVDNA是患者具有传染性的标志HBVDNA对乙肝两对半起补充作用HBVDNA是目前判断乙肝抗病毒药物疗效最敏感的指标HBVDNA可检测出隐匿性慢性乙型肝

7、炎有利于献血员窗口期病毒核酸的筛查和早期诊断提供直接证据缩短“窗口期”HBVDNA检测的临床意义调查表明并不是所有“大三阳”的病人都处于HBV复制期，具有传染性；也不是所有“小三阳”的病人HBV都无复制。因此，要准确知道HBV是否处于复制状态，最准确的方法还是通过检测HBVDNA来决定。HBVDNA检测的临床意义HBVDNA检测的临床意义HBsAg和HBeAg均阳性而HBVDNA阴性？●干扰素或拉米夫定等治疗后病毒复制受抑制。●PCR所用引物相应的DNA序列发生突变，此引物与突变DNA不能配对结合。●病毒DNA整

8、合于宿主肝细胞染色体而血中游离HBVDNA很少或缺乏。目前尚无一种能迅速、直接杀死清除乙肝病毒的药物，最好的抗病毒药物疗效也仅能达到50％左右。目前国际医学界公认的治疗慢性乙肝有确切疗效的抗病毒药物主要有两大类：干扰素：重组人α-1b干扰素、α-2a、α-2b干扰素等。核苷类似物：拉米夫定、阿德福韦。乙肝的治疗主要包括抗病毒、免疫调节、抗炎保肝、抗纤维化等对于HBVDN