亲和素的基础知识

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1、1．亲和素　　亲合素又称卵白蛋白或抗生物素，分子量为68000，pI10～10.5；在pH9～13缓冲液中性质均稳定，耐热并耐多种蛋白水解酶的作用。天然亲合素为碱性蛋白，由4个相同的亚单位构成4聚体；每个亲合素亚单位通过其结构中的色氨酸残基与生物素中的Ureido环（I环）结合。因此，1个亲合素分子存在4个与生物素分子结合位点，其结合常数（Ka）高达1015mol/L。　　通常，亲合素的活性单位是以亲合素结合生物素的量来表示的，即以能结合1Pg生物素所需要的亲合素量为1个亲合素活性单位。一般1Pg亲合素约含13～15个活性单位。2．链霉亲合素

2、　　链霉亲合素(SA)是与亲合素(A)有类似生物学特性的一种蛋白质。是由Streptomycesavidin菌在培养过程中分泌的一种蛋白质产物，SA也可通过基因工程手段生产。SA分子量为65000，由4条序列相同的肽链构成，每条SA肽链可以结合1个生物素分子。因此与A一样，每个SA分子也具有4个可与生物素分子结合位点，其结合常数与A相同为1015mol/L。约为抗原抗体间ka（105～1011mol/L)的1万倍以上。　　SA与A的ka虽然相同，但在实际应用中其检测灵敏度明显优于A，其原因是SA为略偏酸性的蛋白。SA的每条肽链含159个氨基酸

3、残基，其中赖氨酸、精氨酸等碱性氨基酸的含量比一般亲合素少，反之含酸性氨基酸较多，其等点为6.0，较A（pI=10）为低，同时在结构中SA不含任何糖基，而A含糖可高达10%。A的高pI及高含糖结构导致在聚苯乙烯板和硝酸纤维素膜上或与组织细胞DNA结合时，易产生一定程度的非特异性结合，造成较高的显色背景，而SA较A在应用中明显克服了这一缺点。　　SA最高的活性可达18u,较A高（15u）；与A一样，每个SA分子也具有4个可与生物素分子结合位点，故其效应相同。