一株多菌灵降解细菌分离、鉴定及系统发育分析

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1、!!卷!期微生物学报%&’(!!.&(!"##!年$月!"#$%&"’()&(*(+&"$,&-&"$)*+*,-"##!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!一株多菌灵降解细菌的分离、鉴定及系统发育分析//"//，"/张桂山贾小明马晓航周宏斌程天凡（/浙江大学生命科学学院杭州C/##"6）（"广州出入境检验检疫局广州5/#4"C）摘要：从被多菌灵污染的湖南红壤土中分离到一株能以多菌灵为唯一碳源和能源生长的菌株/1/，该菌在含酵母膏多菌灵（5##8+EF）的无

2、机盐培养基中与无酵母膏的多菌灵（5##8+EF）无机盐培养基中，"!G对多菌灵的降解率分别为65H54I和/6H/4I。根据表型特征、JKL含量及/4MNO.)序列分析将菌株/1/鉴定为!1PN&-3&Q9?-3N:9中的!"#$%&’()",R（(罗尔斯通氏菌）。关键词：多菌灵，生物降解，/4MNO.)，罗尔斯通氏菌，系统发育中图分类号：S6C6文献标识码：)文章编号：###/14"#6（"##!）#!1#!/01#5多菌灵（L9NQ3=G9A:8）是一种广谱、高效内吸性取单菌落转接至多菌灵分离纯化斜面培养基上，连苯并咪唑类杀真菌农药，国内外

3、广泛应用于谷类、蔬续转接、传代5次，仍能在多菌灵培养基上生长的菌菜、果树等植物的病害防治中。多菌灵化学性质稳种选用。［/］定，在环境中降解半衰期较长，能持久地残留在使土样：为多菌灵污染的湖南祁阳红壤土。多菌用部位，易致累积效应，其在水果、植物、土壤中的残灵：为江苏盐城利民化工厂产品，纯度为6!H4I。留可通过食物链影响人们健康。据研究多菌灵还有富集培养基：.9L’/H#+，X"YPZ!/H#+，[+MZ!·0Y"Z［"］［C，!］引起肝病，导致染色体畸变的作用，因而其在/H#+，L9LZC/H#+，多菌灵（多菌灵先用少量稀盐酸溶［5］环境中的降

4、解代谢也受到普遍关注。T’33U3N等曾解设5个浓度梯度，分别为"##8+EF、!##8+EF、研究过多菌灵的光化学降解，而多菌灵在环境中主5##8+EF、4##8+EF、$##8+EF），蒸馏水/###8F，RY［4］要是通过生物降解。因此，分离筛选能高效降解0H#。分离纯化培养基：.9L’/H#+，X"YPZ!/H#+，多菌灵的微生物是人们进行多菌灵环境污染治理、[+MZ!·0Y"Z/H#+，（.Y!）"MZ!"H#+，L9LZC/H#+，多土壤生物修复的一种有效途径。但到目前为止，有［0，$］菌灵（5个浓度梯度同富集培养基），琼脂"#+，

5、蒸馏关多菌灵降解细菌的报道尚不多见。本文报道水/###8F，RY0H#。从多菌灵污染的湖南红壤土中分离到的一株多菌灵!"#降解菌多菌灵降解能力测定降解细菌/1/的分离、鉴定以及在系统发育中的地在5个含酵母膏和5个无酵母膏的多菌灵降解位，以期为多菌灵污染的生物修复和治理提供一些性试验培养基中以"I的接种量接入菌株/1/，同时基础理论资料。做5个不接种（无菌水代替）对照。置于C#V，"##NE!材料和方法8:=摇床培养，每隔CG测定各培养液中的多菌灵残留量。!"!多菌灵降解细菌的富集、分离和纯化在058F不同浓度梯度的多菌灵富集培养液中多菌灵降解性

6、试验培养基：.9L’/H#+，X"YPZ!分别加入0H5+土样，C#V、"##NE8:=摇床培养CG后，/H#+，[+MZ!·0Y"Z/H#+，（.Y!）"MZ!"H#+，L9LZC吸取/8F转接至相同浓度的多菌灵富集培养液中，/H#+，酵母膏#H/5+，多菌灵5##8+，蒸馏水/###8F，连续富集、转接5次后，用接种环蘸取少许富集培养RY0H#。液，在相同浓度的多菌灵分离纯化培养基平板上划!"$多菌灵含量的测定［6］线分离，"$WC#V培养，待平板上出现单菌落后，挑薄层紫外扫描法：采用高效薄层层析硅胶板基金项目：国家科技部社会公益研究专项资

7、金项目（/001"1"）"通讯作者。23’：$4150/1$460/64"；7189:’：;:9<:9&8:=+>"/?=(?&8作者简介：张桂山（/604@），男，安徽省寿县人，硕士研究生。主要从事应用微生物学研究。7189:’：AB9=++*:,B9="##C>D9B&&(?&8(?=收稿日期："##C1/"1#6，修回日期："##!1#!1/"%&O微生物学报%%卷!"#$（%青岛海洋化工厂产品，&’()*#’()）。取/结果和讨论&$)+多菌灵降解液到$’)+锥形瓶中，加#’)+二氧六环，在水浴上加热$),-后加&)+乙酸，将此溶/"!

8、降解菌的分离和筛选液冷却至室温；用!%砂芯漏斗过滤到$’)+容量瓶在多菌灵浓度为#’’)82+、%’’)82+、$’’)82+的中，用&$)+二氧六环