补肾方药对D-半乳糖致衰老大鼠神经细胞凋亡及学习记忆的影响.pdf

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1、8中药药理与临床2014；30(3)补肾方药对D．半乳糖致衰老大鼠神经细胞凋亡及学习记忆的影响’康湘萍，梁超，金国琴一，张学礼(上海中医药大学基础医学院生化教研室，上海201203；实验中医学教研室，上海201203)摘要目的：观察左归丸及熟地黄对衰老大鼠学习记忆能力以及与凋亡相关的pmBDNF、p75NTR、so~iHn、ca8pa8e_3、Bcl-2及Ba】【mRNA表达的影响。方法：以500mg／kgD．半乳糖腹腔注射制造衰老大鼠模型，随机分为衰老模型组、衰老左归丸组10．2g／kg、衰老熟地组8g／kg和衰老熟地组4g／kg，另设青年对照

2、组。采用Morris水迷宫法观察大鼠空间学习记忆能力、EUSA法检测大鼠血清p一半乳糖苷酶含量、透射电镜检测大鼠海马神经细胞凋亡情况、实时定量PCR法观察海马组织pmBDNF、p75NTR、so~iHn、caspase-3、Bcl_2及BaxmRNA表达变化；同时观察左归丸及熟地黄对上述指标的影响。结果：与青年对照组比较，衰老大鼠空间学习记忆能力明显降低；血清B一半乳糖苷酶含量显著增高，神经细胞存在凋亡，海马组织proBDNF、p75NTR、so~iHn、caspase_3及BaxmRNA表达显著增加，Bcl-2mRNA表述明显减少。与衰老模型组

3、比较，左归丸10．2g／kg能显著提高衰老大鼠空间学习记忆能力，降低血清p-芈乳糖苷酶含量，下调海马pmBDNF、caspase-3及s0ti1inmRNA表达；熟地黄8g／kg和4g／kg均能明显提高衰老模型大鼠的空间学习能力，降低血清B一半乳糖苷酶含量，下调海马pmBDNF和softenmRNA表达，除此以外，熟地黄4g／kg还能显著下调海马casp鹊e-3mRNA的表迭；各用药组之间无显著差异。结论：左归丸及熟地黄可能是通过调节凋亡相关分子的表达，从而改善衰老大鼠空间学习记忆能力，延缓衰老。关键词左归丸；熟地；衰老大鼠；凋亡；学习记忆衰老是

4、一种复杂的生物学过程，伴随着衰老，机体会出现鼠B．半乳糖苷酶ELISA检测试剂盒(R&D，上海安迪生物科技一系列生理功能下降或紊乱的表现，其中有一个显著的特征就有限公司)，引物合成(上海英潍捷基贸易有限公司)，Prime—是神经发育能力的退化，严重的会进一步发展为老年痴呆。因SefiptTMRT试剂盒(TaKaRaCode：DRPO37A，大连宝生物工程此，探寻增龄性学习记忆能力减退的机制，寻找相关药物预防有限公司)，实时定量PCR试剂盒(德国QIANGEN，上海凯杰生及治疗具有非常重要的意义。本研究从soailin．pmBDNF．物技术有限公司

5、)。p75NTR三聚体介导的神经细胞凋亡人手，探究衰老大鼠学习1．4仪器Morris水迷宫测试分析软件(荷兰Nodds公司)，记忆减退的分子机制，并观察经典补肾方药左归丸及其君药熟酶标仪(美国BIO-'rEX全自动酶标仪，型号：Synergy2)，超薄切地黄对该途径的干预作用，为临床运用补。肾方药益智健脑提供片机(型号：LeieaUkraeutR)，透射电镜(型号：Ph~psTeenm．12实验依据。Bi~win)，eco实时荧光定量PCR仪(美国IHumina公司)。1．5方法大鼠称重后随机分为5组：青年对照组、衰老模型I材料与方法组、衰老左归

6、丸组、衰老熟地黄组8g／及衰老熟地黄组4g／kg。除青年对照组外，其余各组大鼠均腹腔注射D．半乳糖生理盐水1．1试验药物左归丸组成：熟地黄(产地河南)20g、山药(产500mg／kg，连续造模56天【IJ，青年对照组腹腔注射等量生理盐地河北)10g、菟丝子(产地山东)10g、枸杞子(产地宁夏)10g、山水；衰老左归组灌服左归丸药液，剂量相当于临床成人每kg体茱萸(产地浙江)10g、牛膝(产地河南)7．5g、龟板胶(山东华信重剂量的7倍J，衰老熟地黄组8g／kg灌服熟地黄药液8g／kg制药)10g、鹿角胶(山东华信制药)10g，上述中药均购自上海康

7、体重，衰老熟地黄组4g／kg灌服熟地黄药液4g／kg体重，青年对桥中药饮片有限公司，并执行2010年中华人民共和国药典标准照组和衰老模型组灌服蒸馏水，每只大鼠的灌胃体积均为4ml，及2008年上海市中药饮片炮制规范。左归丸中除龟板胶和鹿连续56天【。角胶外，分别用水浸泡，浸泡用水量为药量克数的10倍，浸泡1．5．1空问学习记忆能力测试采用Morris水迷宫法J，平lh后，武火煮沸，文火煮20rain，过滤，重复上述步骤煎煮2次，台设于迷宫西南象限正中，水面高出平台1．5cm，水温保持在19将2次的药液合并后浓缩；敲碎龟板胶及鹿角胶后将其烊化，并—

8、20℃，大鼠连续训练5天，每天两次，分别从正北、正东两个起混合在上述药液中进一步浓缩为每lml药液含lg生药的提取始点投放，设定最长游动