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《细纹豆芫菁3-羟甲基戊二酰辅酶A-还原酶基因全长cDNA克隆及生物信息学分析-论文.pdf》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、昆虫学报ActaEntomologicaSinica,July2012,55(7):860—868ISSN0454-6296细纹兀菁3-羟甲基戊二酰辅酶A-还原酶基因全长eDNA克隆及生物信息学分析姜鸣,霍棠,吕淑敏,张雅林(西北农林科技大学植保资源与病虫害治理教育部重点实验室,陕西杨凌712100)摘要:3-羟甲基戊二酰辅酶A一还原酶(3-hydroxy-3一methylglutarylcoenzymeAreductase,HMGR)是甲羟戊酸途径的关键酶。获得芫菁体内HMGR基因信息是确定甲羟戊酸途径与斑蝥素合成相关性的基础。本研究利用RACE技术从细纹豆芫菁Epicautamann
2、erheimi(Maklin)体内克隆获得HMGR基因全长cDNA序列,命名为EmHMGR(GenBank登录号为JQ690539)。该基因全长3118bp,其中5端非翻译区178bp,3端非翻译区414bp,开放阅读框2526bp,编码842个氨基酸。推测的蛋白质分子量为92.8kDa,理论等电点为6.0,预测分子式为C,H6604N∞O:S。,不稳定系数为43.37,总亲水性系数为0.091,为疏水性不稳定蛋白。序列分析发现该基因编码的蛋白与已报道的其他昆虫HMGR的氨基酸序列一致性达50%以上,而且包含HMGR—ClassI保守功能域、固醇敏感多肽区及HMGR蛋白的其他保守功能位点
3、。系统进化分析发现该基因与叶甲科昆虫HMGR基因的关系最近。本研究首次从芫菁科昆虫体内克隆获得甲羟戊酸途径的关键酶EmHMGR基因,为后期芫菁体内斑蝥素生物合成途径的研究奠定了基础。关键词:细纹豆芫菁;3-羟甲基戊二酰辅酶A一还原酶;RACE;克隆;生物信息学分析;甲羟戊酸途径中图分类号:Q966文献标识码:A文章编号:0454-6296(2012)07-0960-09Cloningandbioinformaticalanalysis0f3-hydroxy-3-methylglutarylcoenzymeAreductasegenefromtheblisterbeetleEpicauta
4、mannerheimi(Coleoptera:Meloidae)J1ANGMing,HUOTang,IShu—Min,ZHANGYa—Lin(KeyLaboratoryofPlantProtectionResourcesandPestManagement,MinistryofEducation,NorthwestA&FUniversity,Yangling,Shaanxi712100,China)Abstract:3.Hydroxy.3.methylglutarylcoenzymeAreductase(HMGR)isakeyenzymeofthemevalonatepathway.Obt
5、ainingHMGRgeneinformationisthebasisofstudyingtherelationshipbetweencantharidinbiosynthesisandthemevalonatepathway.Inthisstudy,afull—lengthcDNAoftheHMGRgenewasclonedfromtheblisterbeetleEpicautamannerheimi(Maklin)bvRACEtechnology,whichwasnamed(GeneBankaccessionno.JQ690539).Thefull—lengthofEmHMGRis3
6、ll8bpwithanORFof2526bp,containinga5一untranslatedregion(5,_UTR)of178bpanda3UTRof414bp.Itencodesadeducedproteinof842.aminoacidresidues,withapredictedmolecularmassof92.8kDaandisoeletriepoint(pI)of6.0.ItspredictedmolecularformulaisC4l35H66o4N109801216S50.Bioinformaticalanalysisshowedthatitsinstabilit
7、yindexis43.37andtheGRAVY0.091.suggestingthatEmilMGRisanunstablehydrophobicprotein.ThededucedproteinEmHMGRhastheconservedfunctionaldomainofHMGRClassIandthesterol—sensingdomain。andsharesmorethan50%aminoacididentitywithHM
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