植物3-羟-3-甲戊二酰辅酶a(hmg-coa)还原酶活性直接光度法

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1、植物3-羟-3-甲戊二酰辅酶A（HMG-COA）还原酶活性直接光度法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途植物3-羟-3-甲戊二酰辅酶A（HMG-COA）还原酶活性直接光度法定量检测试剂是一种旨在运用3-羟-3-甲戊二酰辅酶A作为底物，在还原酶的催化下，还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）氧化后吸光峰值的降低，即采用光度法来测定植物裂解样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种植物组织，包括种子（seed）、叶片（leaf）、根（root）、胚胎

2、叶（cotyledon）、上胚轴（epicotyl）等裂解悬液、微粒体，或纯化酶样品3-羟-3-甲戊二酰辅酶A（HMG-COA）还原酶的活性检测，以及抑制剂筛选。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。技术背景甲戊二羟酸通路（mevalonatepathway），又称为3-羟-3-甲戊二酰辅酶A（HMG-COA）还原酶通路或甲戊二羟酸依赖性通路，是所有高等真核生物和许多细菌具有的重要的细胞代谢通路，用于体内产生二甲基丙烯焦磷酸（dimethylallylpyrophosphate；DMAPP）和

3、异戊二烯焦磷酸（isopentenylpyrophosphate；IPP）作为生物大分子合成的基础，包括蛋白质异戊二烯化、细胞膜维护、激素合成、蛋白固着、蛋白糖化等。3-羟-3-甲戊二酰辅酶A还原酶（3-hydroxy-3-methyl-glutaryl-CoAreductase；HMGR；EC1.1.1.34）是控制甲戊二羟酸通路的关键的酶，调节胆固醇和类异戊二烯脂分子的产生。HMG-COA还原酶位于内质网膜上，含有8个跨膜结构域，其中活性结构域在细胞浆里。HMG-COA还原酶是许多降脂药物的靶标

4、，包括lovastatin（Mevacor）、atorvastatin（Lipitor）、pravastatin（Pravachol）和simvastatin（Zocor）。在植物组织中，HMG-COA还原酶位于质体、线粒体和内质网上，含有2个跨膜结构域，组织发育、光照、病原菌感染、创伤等将诱导HMG-COA还原酶活性增加。在HMG-COA还原酶的催化下，将4个电子的3-羟-3-甲戊二酰辅酶A（HMG-COA）还原为甲戊二羟酸（mevalonate），同时产生还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（redu

5、cednicotinamideadeninedinucleotidephosphate；NADPH）被氧化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（oxidizednicotinamideadeninedinucleotidephosphate；NADP），其氧化后的吸光峰值变化（340nm波长），来定量分析3-羟-3-甲戊二酰辅酶A（HMG-COA）还原酶的活性。3-羟-3-甲戊二酰辅酶A（HMG-COA）还原酶反应系统为：HMG-COAreductaseHMG-CoA+2NADPH+2H＋→mevalo

6、nate+2NADP－+2CoA-SH产品内容清理液（ReagentA）60毫升裂解液（ReagentB）25毫升缓冲液（ReagentC）3毫升反应液（ReagentD）500微升底物液（ReagentE）500微升阴性液（ReagentF）500微升产品说明书1份保存方式4保存裂解液（ReagentB）、缓冲液（ReagentC）、反应液（ReagentD）和底物液（ReagentE）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；反应液（ReagentD）和底物液（ReagentE）避免光照；有效保

7、证6月用户自备1.5毫升离心管：用于样品保存的容器15毫升锥形离心管：用于样品制备的容器DOUNCE匀浆器：用于组织匀化（微型）台式离心机：用于样品制备超速离心机：用于微粒体制备200微升1厘米光径比色皿或96孔板：用于光度分析的容器分光光度仪或酶标仪：用于光度分析实验步骤一、样品准备1．准备好新鲜的植物组织（叶片、谷粒、种子等），并秤重以确定1克组织重量2．（选择步骤）放进预冷的15毫升锥形离心管3．（选择步骤）加入3毫升清理液（ReagentA）清洗1次4．即刻用刀片切碎组织5．放进一个预冷的1

8、5毫升锥形离心管6．加入预冷的1毫升裂解液（ReagentB）7．涡旋震荡5秒，充分混匀8．即刻放进预冷的DOUNCE匀浆器，在冰槽里用匀浆棒匀化组织（约80下）9．将所有组织匀浆物移入1.5毫升离心管，放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为9000g10．小心移出上清液（注意：不要触碰沉淀物）到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管11．（选择步骤）如果上清液含有肉眼可见的残渣，重复离心5分钟一次，速度为9000g12．即刻移入到1.5毫升离心管或超速离心管——此为