产淀粉酶菌株的分离与提纯.doc

《产淀粉酶菌株的分离与提纯.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、产淀粉酶菌株的分离与提纯目的：提取产淀粉酶菌株，学习分离纯化产淀粉霉菌株的方法。原理：土壤中产淀粉酶的主要是芽孢杆菌属，放线菌属。芽孢杆菌能产芽孢，在沸水中加热不会失去生理活性。但是不能产生芽孢的细菌会失去活性。因而得到芽孢菌属。经过进一步的分离鉴定得到枯草芽孢杆菌。材料、仪器：1.土壤采集，2.试剂琼脂淀粉3.器皿培养皿试管250ml三角瓶移液管洗耳球玻璃棒酒精灯接种环量筒量杯。4.仪器高压蒸汽灭菌锅干热灭菌锅电炉恒温培养箱5.步骤1.培养基和准备器皿的灭菌备齐以下物品洗干净的培养皿10个、试管5支、250ml三角瓶2个、10ml刻度吸管1支

2、、1-2ml的刻度吸管各一支、洗耳球1个、玻璃棒1支、量筒1个。1.1营养培养基的制备称量1.2克淀粉，加少量水加热至溶化。然后加6.8克得营养琼脂，加水至150ml，煮沸后倒入250ml的三角瓶中，加棉塞灭菌。1.2无菌水的制备9ml蒸馏水至试管中，湿热灭菌。90ml蒸馏水至250ml三角瓶中，湿热灭菌。1.3常用器皿的准备培养皿的包装后，刻度吸管包装后干热灭菌。2.菌悬液的制备和梯度稀释2.1菌悬液的制备提前在预定地点将馒头屑埋入土壤表层下5-10cm。过3-4天后，在馒头屑周围取10g肥土。把采集到得土壤放到纸袋中带回实验室。加至90ml

3、的无菌水中震荡，充分溶解。过滤后取滤液，加热煮沸持续15分钟。静止5分钟冷却。2.2梯度稀释另取装有无菌水的试管5支，表上10-2、10-3、10-4、10-5、10-6.用无菌刻度吸管吸取1ml土壤溶液加入的10-2的试管中，并在试管中反复吹洗几次混匀。同法从10-2试管中吸取1ml菌液支10-3试管中，依次稀释成10-4、10-5、10-6的稀释液。2.3稀释混合倒平板法分离纯化菌株首选10-3、10-4、10-5的稀释液接种到培养皿上。每个梯度接种3个培养皿。将培养皿放置到恒温培养箱中37摄氏度下，培养24-48小时。3.平板划线法纯化菌

4、株挑取菌落周围出现透明圈的菌落，才用平板划线法纯化，并将纯化的菌株接种于斜面保存。