冰冻切片及染色A(先固定脱水式).doc

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1、冰冻切片及染色A(先固定脱水式)一、组织包埋冰冻（先固定脱水式）试剂：30%sucrose、OCT1.组织块于4%PFA中4°C，2h。因为PFA固定时间超过15min，可能需要抗原修复！这一点不如先切片后固定式法好，所以后面的PBST100不能少！2.PBSwash三次（快速+10min+3hour）3.30%sucrosewash三次（快速+10min+10min）4.30%sucrose冷室过夜（直至组织沉底）5.用OCT替换其中1/2~2/3的sucrose，冷室，摇动，1hour。6.尽量去除组织表面的OCT/sucrose混合物，用OCT包埋组织，液氮冻之当组

2、织很小时：取小片圆形色纸，滴加一小滴OCT，将组织放入其中，先-20度冻硬，将此OCT小块包埋入大块的OCT中或用蓝色小圆子标记。液氮冰冻样品时，在保温盒放一泡沫，组织放泡沫盒上即可。7.-80度保存。摇动冷室：可用泡沫盒装冰放在摇床上进行。二、切片1.注意片子正反面，提前标记，厚度10um为宜。2.贴片，晾放1hour，-20~-80度保存。