几种固定液在冰冻切片中的染色效果分析

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1、几种固定液在冰冻切片中的染色效果分析株洲市妇幼保健院湖南株洲412000【摘要】目的冰冻切片是一种在低温下使组织快速冷却，进行切片的一种方法，现在多应用于外科手术中快速病理诊断。影响制片质量的因素诸多，固定就是其中之一，为了在短时间内制作出一张高质量的冰冻切片，固定液的选择显得尤为重要。通过对4种固定液在冰冻切片中的染色效果进行对比分析，以筛选出对冰冻切片最适合的固定液，提高组织切片的染色效果。方法选取四种使用频率较高的固定液，对63例乳腺组织标木冰冻切片组织进行固定，将固定后的冰冻切片进行HE染色，对染色结果进行对比分析。结果使用甲醇固定液固定后，细胞形态显示一级、二级和三级的比例

2、分别为92.1%、7.9%和0.0%,和其他三组两两比较，优势明显，差异有统计学意义(P<0.05)；甲醇固定液固定后组织的染色效果优于其他三组，差异有统计学意义(P<0.05)。结论甲醇固定液对冰冻组织切片固定后，对细胞形态的影响小，且染色后细胞形态基木正常无明显收缩，胞浆胞核对比显著，染色效果理想。【关键词】固定液；冰冻切片；HE染色冰冻组织切片染色对于临床病理学诊断有重要辅助价值［1］，选择不同的固定液对组织进行固定后，组织染色效果也不同程度的受到影响［2］。为了将不同固定液在冰冻组织切片中的染色效果进行对比分析，筛选理想的固定液，提高HE染色的效果，笔者选取了常用的四种固定液

3、对63例乳腺组织标木的冰冻切片进行固定处理，固定后进行HE染色，具体报告如下：1资料和方法1.1临床资料收取63例乳腺组织标木，括正常乳腺组织8例、导管原位癌11例、浸润性乳腺癌组织标木23例和乳腺肌瘤标木21例。1.2固定液:AFA液（95%乙醇85ml、浓甲醛10ml、冰醋酸5ml）、95%乙醇、丙酮、甲醇（95%乙醇45ml、甲醇45ml、冰醋酸10ml）1.3方法1.3.1取材及切片大小为1.5m*1.5cm,厚2-3cm的新鲜乳腺组织，挤少许普通胶水放入冷冻组织托盘上，将胶水底层冷却变硬后，将组织块放在变硬的胶水上，再涂适量胶水覆盖在组织上30s,用冰冻锤使其快速冷却。1.

4、3.2固定及染色切片所有组织标本进行包埋处理后，连续切片，分别制成四张4μm厚度的组织切片共63*4张，固定5分钟。固定液包括：①AFA液；②95%乙醇；③丙酮;④甲醇。固定后进行HE染色。1.4评估标准染色后，63*4张组织切片于显微镜下观察，判断染色效果。具体包括观察细胞固定后的收缩情况及染色后组织的清晰情况，每项评估指标分三级，级数越低，则表示固定后的染色效果越佳［3】。其中细胞形态的判定为：细胞形态基本正常，没有出现明显的收缩为一级；细胞形态发生改变，明显收缩为二级；细胞出现严重的收缩为三级。组织清晰度的判定为：组织结构清晰，胞浆及胞核染色对比明显为-级；组织结构清晰度

5、一般，胞浆和胞核对比不明显为二级；组织结构模糊，胞浆和胞核对比差为三级。1.5统计分析对四组切片的统计数据进行比较，其差异采用卡方和T检验，当P<0.05吋，差异有统计学意义。2实验结果2.1四种固定方式对细胞形态的影响见表1,63例组织分别使用四种固定液固定后行HE染色，镜下观察细胞收缩情况，发现细胞的形态发生了不同程度的改变，其中：使用甲醇固定后细胞形态显示一级、二级和三级的比例分别为92.1%、7.9%和0.0%,和其他三组两两比较，优势明显，差异有统计学意义（P<0.05）。提示相比于其他三种固定液，使用甲醇固定引起细胞的收缩程度最轻，细胞形态的变化程度最小，即对细胞形态变化

6、的影响最小。3讨论对病变组织进行冰冻切片染色，从而协助临床医生确定患者组织病变的性质,指导临床诊断和制定治疗方案都有重要的临床指导价值［4］。因此，对组织进行冰冻切片、固定、染色，每-步都十分重要。固定液固定组织会对组织切片造成不同程度的影响，进而会影响染色效果。0前，对于冰冻切片的固定液冇许多种，选择有效的固定液对于提高染色效果意义重大［5】。因此为了筛选出较为理想的固定液对冰冻组织切片进行固定，减轻固定液对细胞形态的影响，提高染色效果，笔者进行了本次实验。笔者选取了63例乳腺组织标本，将标本分别制成4张组织切片，使用四种不同的固定液进行固定处理，固定后进行HE染色，镜下观察细胞形

7、态变化及组织的染色情况，对比四种固定液对染色效果的影响。镜下观察细胞收缩情况，发现细胞的形态发生了不同程度的改变，其中：使用甲醇固定后细胞形态显示一级、二级和三级的比例分别为92.1%、7.9%和0.0%,和其他三组两两比较，优势明显，差异有统计学意义（P<0.05）o提示相比于其他三种固定液，使用甲醇固定引起细胞的收缩程度最轻，细胞形态的变化程度最小，即对细胞形态变化的影响最小。进一步镜下观察四种固定液固定后组织的染色情况，结果显示：使用甲醇固定后细胞染