高效液相色谱.ppt

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1、仪器分析INSTRUMENTALANALYSIS教师：谢宝平液相色谱法LC以液体为流动相的色谱法称为液相色谱法LiquidChromatography按分离机制液相色谱法类型吸附色谱分配色谱离子交换色谱空间排阻色谱3按操作形式液相色谱法类型柱色谱填充柱色谱；整体柱色谱平面色谱纸色谱薄层色谱薄膜色谱毛细管电色谱按分离效能经典液相色谱现代液相色谱液相色谱法类型经典液相色谱:常压下靠重力或毛细作用输送流动相的色谱方法经典柱色谱法平面色谱法现代液相色谱:高压输液泵输送流动相—高效液相色谱法(HPLC)高效液相色谱法HighPerfor

2、manceLiquidChromatography第一节、概述高效液相色谱（HPLC）：高效能固体细微粒为固定相高压输送流动相高灵敏度检测器一、含义二、高效液相色谱与其它色谱方法的比较1.HPLC与经典LC的比较经典LCHPLC固定相颗粒>100μm,不均匀固定相颗粒<10μm,均匀常压下输送流动相高压下输送流动相柱效较低（H↑，n↓）柱效较高（H↓，n↑）分析周期长分析周期短无法在线检测可以在线检测2.HPLC与GC的比较分析对象及范围流动相的选择操作条件GC适于能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品，占有机物的20%流动相为

3、有限的几种“惰性”气体，只起运载作用，对组分作用小加温常压操作HPLC能制成溶液的样品，不受试样的挥发性和热稳定性限制，占有机物的80%流动相为液体或各种液体的混合。它除了起运载作用外，还可通过溶剂来控制和改进分离。室温、高压下进行相同：均为色谱分析法，兼具分离和分析功能，均可在线检测按固定相的聚集状态分类：液-固色谱法液-液色谱法三、HPLC分类按流动相和固定相特征分为正相色谱反相色谱按分离目的分为分析型制备型其它分离机制色谱法：亲合色谱法胶束色谱法手性色谱法毛细管电色谱法三、HPLC分类当前最常见的HPLC分离机制：化学键

4、合相色谱法按分离机制分类：基本分离机制：分配色谱法吸附色谱法离子交换色谱法空间排阻色谱法极性增加不溶于水溶于水非极性离子非离子极性吸附反向分配分配正向分配离子交换尺寸排阻凝胶渗透凝胶过滤分子量各种HPLC方法的应用范围及对象80%以上的有机物可用HPLC分析，特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差的化合物分析，显示出优势。第二节HPLC仪器进样系统检测器色谱图色谱柱溶剂高压泵混合器高压输送流动相高效固定相在线检测高灵敏检测器第二节HPLC仪器高压输液系统：储液罐、吸滤器、高压输液泵、脱气装置及梯度洗脱装置进样系统：进样器，进

5、样阀分离系统：色谱柱，恒温箱检测系统：检测器记录系统：记录装置、色谱工作站1、贮液器和吸滤器：一、高压输液系统贮液器:0.5-2L的玻璃瓶溶剂吸滤器:Ni合金，孔约0.45m，防止颗粒物进行泵内。2、高压输液泵一、高压输液系统要求流量准确可调、可调范围宽：流动相流速在0.5-2mL/min，输液泵的最大流量5-10mL/min耐高压：输出压力常达30-60MPa液流稳定。结构材料应耐化学腐蚀活塞型往复泵——液相色谱仪中使用最广泛的恒流泵双活塞型往复泵防止固体微粒进入泵体流动相不应含有腐蚀性物质防止溶剂瓶内的流动相被用完不超过

6、规定的最高压力流动相须先脱气高压输液泵操作注意事项一、高压输液系统离线超声波振荡脱气在线惰性气体鼓泡吹扫脱气在线真空脱气装置3、脱气装置：将分子量较小的气体从溶剂中除去洗脱技术等度洗脱:在样品组分的分析周期中，流动相的组成比例和流速恒定不变的洗脱方式。等度洗脱：适合于组分数目较少、性质差别不大的试样。洗脱技术梯度洗脱：在同一个分析周期中，按一定程度不断改变流动相的浓度配比。梯度洗脱：适合于用来分析组分数目多、性质相差较大样品。梯度洗脱优缺点：能缩短分析时间，提高分离度，改善峰形，提高检测灵敏度。可能引起基线漂移，重现性降低。一

7、、高压输液系统4、梯度洗脱装置：高压梯度低压梯度一、高压输液系统高压梯度：用于二元梯度，用两个泵分别按设定的比例输送A和B两溶液至混合器一、高压输液系统低压梯度：只用一个高压泵，在泵前安装了一个比例阀，混合就在比例阀中完成。二、进样系统将样品溶液准确送入色谱柱的装置常用手动进样器——六通阀进样器，——手动方式、自动方式样品定量管二、进样系统六通阀进样LoadInject自动进样器三、色谱柱柱类型管内径柱长填料粒径流速检测池体积（mm）(cm)(um)(ml/min)(ul)常规2-510-255-100.5-2小于10快速2-

8、53-532-5小于3微径0.5-110-301-30.1-1小于1分为常规、快速、微径柱四、检测系统用于连续监测色谱柱流出物的组成和含量变化。专属型检测器：紫外、荧光、电化学检测器通用型检测器：示差折光，蒸发光散射检测器1、紫外检测器工作原理：紫外可见分光光度法应用最广泛的