维生素B12含量测定.ppt

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1、分析化学实验药物分析教研室维生素B12注射液鉴别、检查和含量测定P91实验十四1、维生素B12主要来源是动物性食物，存在于动物肝脏、牛肉、猪肉、蛋、牛奶和奶酪中;2、在吸收时需与钙结合才能有利于人体的机能活动;3、维生素B12能促进红血球的形成和再生，防止贫血；4、促进儿童发育；能使脂肪、碳水化合物、蛋白质适宜地为体内所利用。5、主要用于治疗恶性贫血，与叶酸合用治疗因抗叶酸药、脂肪泻等引起的巨幼红细胞性贫血。也用于多发性神经炎、肝炎、肝硬化、白细胞减少症等的辅助治疗，目前疗效有争议。口服维生素B12仅用于已证实维生素B12

2、吸收正常的营养性维生素B12缺乏。维生素B12是含钴的有机药物；为深红色结晶，又称为红色维生素B12或氰钴胺；是唯一含有主要矿物质的维生素。分子量：1355.38分子式：C63H88CoN14O14P一、实验目的：1、掌握Uvmini-1240型的使用方法。2、掌握维生素B12注射液的紫外分光光度法鉴别及含量测定。3、掌握吸收系数法定量测定的计算公式。4、熟悉绘制吸收曲线的一般方法。二、主要仪器与试药维生素B12注射液、维生素B12对照品Mini-1240型紫外-可见分光光度仪、石英比色皿、50ml容量瓶，5ml吸量管精密仪

3、器，小心！三、实验准备1.用标示量0.5mg/ml维生素B12配制贮备液（样品）：吸量管精密量取2.5ml于50ml容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液（约25μg/ml）。2.25μg/ml对照品溶液（实验室提供）四、实验内容实验原理：维生素B12分子结构中有共轭体系，具有紫外吸收，故可采用紫外分光光度法鉴别和测定含量。实验步骤：1、取B12贮备液（约25μg/ml），以蒸馏水做空白液做光谱图（粗扫描），在278nm，361nm，550nm处有吸收峰。2、精测：在以上278nm，361nm，550nm波长分别±

4、1范围内测定吸光度（每转换一次波长以水做空白）记录各最大吸收值。仪器的使用方法开机：打开电源，仪器初始化，约3min完成，然后预热大约0.5h。方法菜单：1，光度值2，光谱3，定量4，选购程序包5，系统设计-------------------------------------------------------输入项目号参数IC包文件发送PC控制五、实验结果鉴别：维生素B12吸收光谱上有三个吸收峰：278nm、361nm、550nm。检查：A361/A278应为1.70-1.88，A361/A550应为3.15-3.45

5、。含量测定：吸收系数法：利用上述361nm处测定得到的吸收度，按其吸收系数E1％1cm=207计算含量及标示量百分含量。计算公式维生素B12吸收光谱上有三个吸收峰：278nm、361nm、550nm。维生素B12在361nm的吸收峰干扰因素少，吸收又最强，中国药典2010版规定：以361nm处吸收峰的比吸光系数E1%1cm值（207）为计算含量依据本品为注射剂，采用紫外吸收系数法测定含量，其计算公式为：按吸收系数法定量计算：C样品（μg/ml）=A361×48.31见P92取对照品测A361做对照A样品B12含量=————×

6、100%A对照C=ECL六、思考题如果取注射液水2ml稀释30倍，在361nm处测定A值为0.698，试计算注射液每1ml含B12多少？如果每1ml标示量为1mg，则计算标示量％