细胞培养第一章 细胞培养的基本知识.doc

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1、第一章细胞培养的基本知识第一节绪论内容1体外体外培养的概念对细胞培养的评价3组织培养的诞生与发展史㈠体外培养的概念1>*体外培养(invitroculture)：是将活体结构成分或活的个体从体内或体外培养其寄生体内取出，放在类似于体内生存环境的体外环境小，让其生长和发育的方法。r细胞培养I组织培养匚器官培养!!胞培养(CellCulture):是指从活体屮取出小块组织分离出细胞，在一定条件下进行培养，使之能继续生存、生长、增殖的一种方法。⑵*组织培养(TissueCulture):指的是从体内取出

2、组织，在模拟体内牛理环境，无菌、适当温度和一定营养条件下，使之生存和生长并维持其结构和功能的方法。*⑶器官培养（OrganCulture）：指应用和组织培养相似的条件，培养的是器官的原基、器官的一部分或整个器官，使之在体外生存、生长和保持一定功能的方法。㈡对细胞培养的评价2、*优点：⑴研究的对象是活细胞：为最重要的优点%1可始终保持细胞的活力；%1可长时期地监控、检测甚至定量评估一•部分活细胞的情况，包括其形态、结构和生命活动。⑵研究的条件可人为控制：%1控制的物理化学条件：PH、温度、02张力、

3、CO2张力（仅可精确控制，乂可保持其相对的恒定）；%1易于施用物理、化学和生物因素等进行实验研究（这些因素同样可处于严格控制Z下）。⑶研究的样本，可以达到比较均一性：%1通过细胞培养一定的代数后，所得到的细胞系则可达到均一性而属于同一类型的细胞；%1需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。⑷研究的内容便于观察、检测和记录：培养细胞可采用各种技术和方法来观察、检测和记录，充分地满足实验的要求。例如：%1倒置相差显微镜、电视、电影等一一直接观察活细胞变化；%1电子显微镜一一分析细胞的超微结构；%1同

4、位素标记、放射免疫等一一检测内物质的合成、代谢的变化。⑸研究的范围比较广泛：%1可用于细胞学、免疫学、肿瘤学、生化学、遗传学、分子生物学、实验医学等多种学科的研究工作；%1可供实验的组织来源众多，包括各种动物的各类组织，例如：1）可以是齿类或哺乳动物；2）可以是动物的胚胎或成体；3）可以是正常的或肿瘤组织。（6）研究的费用相对比较经济：可同时提供大量生物性状相似的实验对彖，耗资少，比较经济。3*缺点：（1）体外培养的组织或细胞与体内相应者仍然存在差异;原因：体外培养的环境与体内实际情况仍不完全相同

5、，特别是培养环境缺乏神经和内分泌系统等的调节。%1缺乏这些控制，使体外培养的细胞比体内细胞的代谢可能更恒定，但可能并不能真实代表细胞的来源组织；%1当细胞被置于体外培养后，生活在缺乏动态平衡的环境屮久了，必然发生变化。提示：对于体外培养细胞，应该把他们视作一种既保持动物体内原细胞一定的性状、结构和功能又具有某些改变的特定的细胞群体,而不能将Z与体内的细胞完全等同(在进行研究、分析吋应予注意)。⑵细胞培养存在一定的不稳定性；例如：反复传代、长期培养者，有可能发生染色体非二倍体改变等，⑶细胞培养对人员

6、、设备等条件要求较高。4・*细胞培养研究的内容:细胞内的活动：例如，能量的代谢、DNA转录、凋亡、蛋口质合成等。⑵细胞内部与细胞外界之间的作用：例如，细胞对外界刺激的反应、约物对细胞的作用、细胞内产物的分泌等⑶细胞与细胞之间的相互作用：例如，形态的改变、细胞与细胞之间的粘着作用、接触抑制、密度抑制等。⑷细胞内的流动：例如，信号的传导、钙离子的流动、RNA的移动、激素受体复合物的移位等。⑸遗传学：例如，遗传学分析、转染、转化等。5・*应用：(1)病毒学：(2)免疫学：(3)遗传学：(4)分化与发育：

7、(5)细胞毒试验：(6)临床医学及生物技术方而的应用：㈢组织培养的诞生与发展史1・早期组织培养⑴组织培养的萌芽试验：1885年德国人Roux首先尝试了用温生理盐水培育鸡胚神经板组织数月，而且首次采用了“Tissueculture"这个词。⑵1887RossHarrison:利用凝I古I的青蛙淋巴液作为培养基，在体外培养青蛙神经峭，维持其活性达数星期，并观察到了神经纤维的生长，从而解决了神经纤维的来源问题。RossHarrison被人称为细胞培养之父。⑶1898年Ljunggren将人体皮肤保存在腹

8、水小几天至几周后再移植手术获得成功。⑷1903年Jolly用玻片悬滴法培养青蚌和蝶嫄白细胞存活近一•个月。⑸1906年Beebe等用动物血清培养狗的传染性淋巴瘤细胞达72小时。2组织培养的建立现代细胞培养是从Harrison(1907)和Carrel仃912)两人开始的。(1)Harrison(1907)培养蛙胚神经成功开始，创建盖片凹玻璃悬滴培养法,即哈里森悬滴培养法。即采用淋巴液做培养基培养蛙胚神经组织生活了数周并观察到神经细胞突起的生长过程。⑵Carrel(1912)用血浆包