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1、打卬细胞培养基本条件1、合适的细胞培养基介适的细胞培养基是体外细胞牛长增殖的垠重要的条件z•，培养某不仅提供细胞营养和促使细胞牛长増殖的基础物质，而H.还提供培养细胞卞长和緊殖的卞存环境。2、优质血清n前，大多数合成培养基都需耍添加血清。血消是细胞培养液中最重耍的成分之一，含有细胞生长所需的多种生长因子及其它营养成分。3、无菌无毒细胞培养环境无菌无毒的操作环境和培养环境是保证细胞在体外培养成功的首要条件。在体外培养的细胞由丁碱乏对微牛-物和有祷物的防御能力，一u被微牛物或有毒物质污染，或者门身代谢物质积累，可导致细胞中毒死广。因此，在体外培养细胞时,必须保持细胞生
2、存环境无菌无毒，及时消除细胞代谢产物。4、恒定的细胞主长温度维持培养细胞旺盛牛长，必须有怛定适宜的温度。5、合适的气体环境气体是哺乳动物细胞培养生存必需条件之一，所需气体主要有低气和二氣化碳。细胞培养基种类与基本成分细胞培养基的种类很多，按其來源分为介成培养基和人然培养基（口前使用的培养妹绝大部分是介成培养堆），按其物质状态分为F•粉培养基和液体培养基两类。干粉培养基需由实验者门（2配制并灭菌，液体培养基由专业商家提供，用户可直接使用，非常方便。1、合成培养基的主要成分有：氨呈酸、碳水化合物、无机盐、维生素及其它辅助物质：氨基酸氨垄酸是纽.成蛋口质的茶本单位。不同
3、种类的细胞对氨慕酸的要求各界,但有儿种氨廉酸细胞I'l身不能介成，必须依靠培养液提供,这儿种氮卑酸称为必需氮卑酸。其屮谷氨醸胺是细胞介成核酸和蛋口质必需的氨基酸，在缺少谷氫酰胺时,细胞牛-长不良而死仁因此符种培养液屮都有较大量的谷氨酰胺。但是,由丁•谷氨酰胺在溶液中很不稳定,应蜀于・20C冰箱中保存，在使用前加入培养液内。已含谷氨酰胺的培养液在4°C冰箱中储存2周以上时，还应重新加入原來最的谷氨酰胺。碳水化介物是细胞牛•长生要能最來源,其中有的是介成蛋口质和核酸的成分。匕要有葡萄糖、核糖、脱氣核糖、丙酮酸钠和酷酸等。无机盐培养液屮无机盐的丄要功能是帮助细胞维持渗透
4、床平衡。此外，通过提供钠，钾和钙离了，帮助细胞调节细胞膜功能。培养液的渗透压是个IF•常重耍的因素，细胞通常可耐受260mOsm/kg〜320mOsm/kg.标准培养液的渗透压在此范围内波动。特别注意：向培养液中加入其它物质有可能会明显改变培养液的渗透压，持别是溶于强酸或强碱屮的物质。向培养液中添加HEPES时需按以下方法调节钠离了浓度。缓冲系统大多数细胞所需pH在7.2-74但是,细胞培养垠适pH值随堵养的细胞种类不同而不同。成纤维细胞喜欢较高pH(7.4・7.7),而传代转化细胞系则需要偏酸pH(7.0・7.4),由于多数培养液靠碳酸氢钠(NaHCO3)与CO
5、2体系进行缓冲，因此，气相中的CO2浓度应与培养液中碳酸氧钠浓度相平衡。如果气相或培养箱空气中CO2浓度设定在5%,培养液＞
6、*NaHCO3的加入昴为1.97g/L；如果CO2浓度维持在10%,培养液中NaHCO3的加入量为3.95g/L・细胞培养瓶盖不应拧得太紧，以保证气体交换。HEPES是一种菲离子缓冲液，在pH7.2-7.4范围内具有较好的缓冲能力,但是非常昂贵,在高浓度时对一些细胞可能有毒。HEPES缓冲液可与低水平的碳酸钠(0.34g/L)共用,以抵消因额外加入HEPES引起的渗透压增加。在这种培养条件下，细胞培养瓶的盖子应拧紧，以防止培养液屮所需的少鼠
7、碳酸盐散入空气中。大多数培养液中含有酚红作为pH指示剂，酸性培养液呈橙黄色，碱性培养液呈深红色。维牛•素在细胞培养中,尽管血消是维生素重要来源,但是许多培养基中添加了各种维牛素以适介更多的细胞系牛长。其它成分在一些较为复杂的培养液中还包括其它一些成分。如在杂交瘤技术中常用的DMEM培养液，使用时还需要补加丙酮酸钠和2•疏基乙醇(2-Mercaptoethanol,2-Me)°2-Me对细胞生长有很重要的作用。有人认为它相当于胎牛血清,有直接刺激细胞增殖作丿lh2-Me的活性部分是硫爼慕，其屮一个重耍作用是使血淸中含硫的化合物还原成谷胱林肽，能诱导细胞的増殖，为非特
8、界性的激活作用。同时避免过氧化物对培养细胞的损害。另个重要作用是促进分裂原的反应和DNA合成，增加植物凝集素(PHA)对淋巴细胞的转化作用,已广泛应用于杂交瘤技术,另外，也开始用于一些难以培养的细胞。2-Me是一种小分子还原剂,极易氣化。分子量为78.13,纯的2-Me是一种无色有刺激味的液体，比重为1.110-1.120(Do20),常用终浓度为5x10-5Mo常配制成0.1M的储存液,用时每升培养液加0.5mL液体培养基保存：液体培养基应于4"C冰箱避光保存，实验前放入37"C预热。未加血洁液体培养基有效期为〔2个月。液体培养基中的L・谷氨酰胺会融着储存时间的
9、延长而慢慢
