细胞培养与体细胞杂交基本知识.doc

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1、细胞培养与体细胞杂交基本知识(-)动物细胞培养?群体培养(massculture)：将含有一定数量细胞的悬液置于培养瓶中，让细胞贴壁生长，汇合(confluence)后形成均匀的单细胞层；?克隆培养(clonalculture)：培养高度稀释的细胞悬液，细胞贴壁生长，每一个细胞形成一个细胞集落，称为克隆?原代培养(primaryculture)：培养来自动物机体的细胞群。将细胞转移到新的容器屮培养称为传代或传代培养(passage),每代细胞分裂约3・6次。?细胞系(cellline)：原代培养

2、细胞成功传代即为细胞系。?细胞株(cellstrain)：从培养细胞中筛选出的具冇特定性质或标志的细胞群。？克隆(clone)：亦称无性系。指由同一个祖先细胞通过有丝分裂产生的遗传性状一致的细胞群。(-)植物细胞培养?外植体培养：诱发产生愈伤组织。用于研究植物的生长发育、分化和变异；进行无性繁殖；制取代谢产物。?悬浮细胞培养：适合于进行产业化大规模细胞培养，制取植物代谢产物。？原生质体培养：培养脫壁后的细胞，特点:-①比较容易摄取外來的遗传物质，如DNA；-②便于进行细胞融合，形成杂交细胞；-③

3、适宜条件下可产生细胞壁，经诱导分化成完整植株。?单倍体培养：通过花药或花粉培养可获得单倍体植株。二、细胞融合?通过培养和介导，两个或多个细胞合并成一个双核或多核细胞的过程称为细胞融合（cellfusion）或细胞杂交。?同核体：相同基因型的细胞融合而成。?异核体：不同基因型的细胞融合而成。?自发融合：同种细胞在培养过程屮自发合并的现象。?诱发融合：异种间的细胞必须经诱导剂处理才能融合。?诱导细胞融合的方法：生物方法（仙台病毒、副流感病毒和新城鸡瘟病毒）、化学方法（聚乙二醇PEG）、物理方法（电击

4、和激光）。现冇研究发现，不论是单细胞生物还是多细胞生物，其细胞死亡都会受受到细胞内某种由遗传机制决定的“死亡程序”控制，也即“程序性细胞死亡"（Programmecelldeath,PCD）.细胞凋亡是能量依赖的细胞内死亡程序活化而致的细胞自杀，由基因控制的细胞自主有序的主动死亡过程。细胞凋亡的形态特征（1）凋亡的起始：微绒毛的消失，细胞间接触的消失，与周围的细胞脱离；细胞质中，线粒体大体完整，染色质固缩；细胞质密度增加，线粒体膜电位消失，通透性改变，释放细胞色素C到胞浆，膜内侧磷脂酰丝氨酸外翻

5、到膜表面?（2）凋亡小体的形成。核膜核仁破碎，核染色质断裂为大小不等的片段，与某些细胞器如线粒体一起聚集，为反折的细胞膜所包围?（3）凋亡小体逐渐被周围专职或非专职吞噬细胞吞噬?生物化学变化?DNA片段化?大分子的合成?tTG（组织转谷氨酰胺酶）的积累并达到较高的水平。■细胞凋亡生理学意义：?生长发育：组织与器官的塑造（趾的分化）；动物变态；皮脐角质形成；?免疫细胞分化：克降选择；?防御：清除衰老细胞、DNA损伤的细胞、以及被病原体感染的细胞。?细胞凋广受抑制冇关的疾病?恶性肿瘤:滤泡性淋巴瘤、

6、乳腺癌、等白血病?自身免疫性疾病：系统性红斑狼疮、肾炎?病毒感染性疾病：腺病毒病、庖疹病毒病?细胞凋亡增多有关的疾病?艾滋病：?神经变性性疾病：早老性迟呆、帕金森病、小脑退化病?骨髓发育不全性疾病?缺血性疾病?酒精中毒性肝炎PCD在植物体整个生长发育过程中普遍存在。植物体在胚胎发育、根、茎、叶、花等器官的形态建成、细胞增殖分化过程中，都伴随有PCD的发生糊粉层细胞的退化消失根冠细胞的死亡导管分子的形成叶片的形成与衰老单性花的形成大小抱子的形成与发育雌、雄配子体的发育胚的发育