细胞培养基MLM-45及培养条件对不同发育时期柞蚕卵巢细胞生长的影响.pdf

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1、5c『enceofSer2012，38(4)：0705—0711ISSN0257—4799；CN32—1115／SE—mail：CYKE@chinajourna1．net．en细胞培养基MLM．45及培养条件对不同发育时期柞蚕卵巢细胞生长的影响王林美李树英岳冬梅范琦叶博赵振军张波(辽宁省农业科学院大连生物技术研究所，辽宁大连116024)摘要选择柞蚕5龄幼虫以及前滞育期、滞育期和解除滞育后发育前期、中期、后期的柞蚕蛹分离卵巢细胞，利用新研制的柞蚕细胞培养基MLM-45，在不同温度、pH值及渗透压条件下进行柞蚕卵巢细胞的体

2、外培养，探究最佳培养条件及卵巢细胞取材的最佳发育时期。用台盼蓝染色活细胞计数方法，测定不同条件下用MLM-45培养基培养的不同发育时期柞蚕卵巢细胞的活力，当在27℃、pH6，3、渗透压325mOsm／kg的备件下培养30d时，上述各发育时期柞蚕卵巢细胞的存活率最高，并且5龄幼虫、前滞育期和解除滞育后发育前期的卵巢细胞出现了增殖，其增殖率分别为54％、64％和2％，滞育期及解除滞育后发育中期和后期的卵巢细胞存活率也分别达到99．6％、96．6％和92．4％。在此最佳培养条件下，各发育时期柞蚕卵巢细胞培养2个月后其形态以圆形

3、和椭圆形为主，尤以5龄幼虫和前滞育期蛹卵巢细胞的培养效果最好，细胞增殖7—8倍，是适于以MLM45培养基培养的最佳发育时期柞蚕卵巢细胞。关键词柞蚕；卵巢细胞；发育时期；细胞培养基MLM_45；培养条件中图分类号$885．1；Q253文献标识码A文章编号0257—4799(2012)04—0705—07E仟ectofMLM-45MediumandCultureConditiononGrowthofPu．palOvarianCellsofAntheraeapernyiatDiferentDevelopmentalStages

4、WANGLin—MeiLIShu—YingYUEDong—MeiFANQiYEBoZHAOZhen—dunZHANGBo(DalianInstituteofBiotechnology，LiaoningAcademyofAgriculturalSciences，DalianLiaoning116024，China)AbstractThepupalovariancellsofAntheraeapernyiatvariousdevelopmentalstages，namelylarvaeofthe5thinstar(5L)an

5、dpupaeatthepre—dispause(PD)，diapause(D)，post—diapauseterminationdevelopment—prophase(PDT—P)，post—diapauseterminationdevelopment—metaphase(PDT—M)andpost—diapauseterminationdevelopment—anaphase(PDT—A)stageswereculturedinvitrowithanewlydevelopedAntheraeaper门celcultu

6、remedium(MLM-45)underdif—ferentculturetemperatures，pHvalues，andosmoticpressurestoinvestigatetheoptimalcultureconditionandbestde—velopmentalstageforisolatingovarianceilsTrypanBLuestainingwasusedtodeterminevitalityofovariancellsfrOmdlf_ferentdevelopmentalstagescult

7、uredInMLM-45mediumunderdiferentcultureconditions．ThehighestsurvivalratesofovariancellsfrOmeachdevelopmentalstagewereobservedundercultureconditionof27oc，pH6．3and325mOsm／kgofosmoticpressurefor30daysNevertheless，underthisculturecondition，ovariancellsfrOm5L，PDandPDT—

8、PstageshadaproliferationrateOf54％．64％and2％respec一tively．whileovariancellsfrOmD．PDT—MandPDT—A收稿日期：2012—03—14接受日期：2012—04—13资助项目：辽宁省自然科学基金项目(No．201102098)。stages