心房颤动转基因治疗.pdf

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1、．664．中国循证心血管医学杂志2013年12月第5卷第6期ChinJEvidBasedCardiovascMed，Dec，20l3，Vo1．5，No．6·综述·心房颤动转基因治疗张El，刘增长【中图分类号】R541．7【文献标志码】A【文章编号】1674—4055(2013)06—0664—05心房颤动(Atrialfibrillation，AF，简称房颤)是临床毒、单纯疱疹病毒等共感染时才能进行有效复制，同时因上最常见的心律失常，是导致脑卒中和心力衰竭的重要原其能将外源基因定点整合至宿主细胞上Il。优点：AAV无致因，严重影响着患者的生活质量Il】。随着年龄的增长，房颤病性，并且在受染体

2、上不会引发免疫反应；宿主范围广，的发病率逐渐增高】。据估计在未来的(20～30)年中房颤既可以感染分裂期细胞，又可感染非分裂期细胞；AAV载患者人数将会是现在的(2-3)倍】，因此积极预防及治疗体可将外源基因整合至宿主基因，并且能长期稳定高效表AF显得极为重要。达；易于分离纯化。腺相关病毒也有一些缺陷，如：外源目前房颤治疗方法主要为：抗心律失常药物或导管消基因容量小及基因表达起效慢等”]。融术治疗房颤以维持窦律；药物或房室结消融合并起搏器1．4慢病毒(Lentivirus)慢病毒载体是以HIV一1(人类免植入术以控制心室率。而目前无论是药物治疗或是非药物疫缺陷I型病毒)为基础发展起来的基因治

3、疗载体，是逆转治疗，均未能达满意效果，所以寻求房颤新的治疗策略也录病毒的一种亚种。】。具有逆转录病毒的基本结构和特性，势当必行。转入的外源基因可与宿主细胞基因组完全整合，建立细胞心房重构(包括结构重构和电重构)是房颤发生的重系长期持续表达外源基因，对细胞感染率高，不产生病毒要原因]。心房重构可造成心房有效不应期缩短及局部心房相关免疫蛋白；区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细传导速度减慢从而形成电折返环导致AF持续发生口]。随着胞和非分裂细胞均具有感染能力。，”】。其主要不利因素为插基因学及基因转染技术的不断发展，从基因水平上阻断房入基因在与宿主细胞整合过程中发生突变或产生野生型病颤发生与维持

4、的重构机制从而达到治愈房颤的目的已有可毒_l，影响目的基因表达或损害患者健康。能。另外，在控制心室率方面，对于长期慢性持续性房颤2基因转染方法患者，通过基因治疗的方法改变房室结内的电活动，延缓心房大小、形态及心房肌厚度限制了直接注射法应房室结传导速度，从而控制AF的心室率。本文主要针对近用，因心房缺乏特异性脉管系统也限制了冠脉灌注法的应年来房颤基因治疗包括载体选择、转染方法及治疗效果进用】。因此，心包内注人病毒转染仅能存在于心外膜层并且行综述。基因在整个心脏心外膜表达而无区域特异性lIl。近十余年随1基因转染载体的选择着转染方法的不断改善，房颤基因治疗有了进一步发展。基因载体选择的基本前提是

5、：目的基因能有效转染目前常用基因转染方法包括：①心房直接涂染法；②心房心肌并在心肌内高效持续性表达，同时还应具备系统毒性肌注射、心肌电穿孑L复合法；③房室结动脉直接灌注法。低、致免疫性弱和易于制造等特点。2．1心房直接涂染法心房肌直接涂染法是目前应用最广泛1．1质粒DNA质粒DNA有致免疫性低、低系统毒性、稳定的心房基因转染方法。2005年KikuchiK．等人将含有腺病毒性高、易制造和高器官选择性等优点【7_，但因质粒种类少，的溶液涂抹于猪心房表面，每次30秒，每侧心房涂染2次，基因转染方式费用高及有效表达率低等限制了其应用]。总时间为60S，其后将心房暴露10分钟以便病毒充分吸收。1．2

6、腺病毒(adenovirus。Ad)腺病毒是一种无包膜的线21天后测量相关指标。该实验中腺病毒载体溶液为20％7(3洛状双链DNA病毒，其具有以下优点：①人类是Ad的自然宿沙姆(poloxamer)一一种在4~C时能充分转化为液体而在体主，故其系统毒性小，致病性低，不易被补体所灭活，可温时能充分转化为凝胶状状态的物质，可使含病毒溶液能直接在体内应用；②其复制不依赖于宿主细胞的分裂，既充分、有效接触心房肌细胞；糜蛋白酶能增加心房目的基可以感染分裂期细胞，又可以感染非分裂期细胞；③由于因转染的透壁性，同时还证明透壁性心房基因转染所需最其感染细胞H~DNA不整合到宿主染色体上，不存在激活致佳糜蛋白

7、酶在浓度为0．5％；该法对心肌细胞仅有轻微炎症癌基因或插入突变等危险；④腺病毒可制造出高滴度病毒反应；此外心室、肺脏、肝脏、脾脏、肾脏、骨骼肌及性溶液提高转染效率；⑤腺病毒可携带外源基因量大(可达腺中均未见腺病毒相关基因表达，同时实验中未发生自发28kb～34kb)ll；⑥基因表达至高峰时间短(7天)，能短期性的心律失常ll。此后Amit，G．，GarashiT．等人均采用类似观察目的基因表达效果”。主要不足