沱茶总黄酮的提取及含量测定.pdf

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1、第3O卷第2期平顶山学院学报Vo1．3ONo．22015年4月JournalofPingdingshanUniversityApr．2015沱茶总黄酮的提取及含量测定熊伟，张晓娟，杨飞4，杨勇琴，张海洋(1．大理学院基础医学院，云南大理671000；2．云南省昆虫生物医药研发重点实验室，云南大理671000；3．大理市第一人民医院，云南大理671000；4．云南农业大学烟草学院，云南昆明650201)摘要：采用超声波乙醇法从云南沱茶中提取总黄酮类化合物，单因素实验分析乙醇浓度、提取时间和料液比3个因素对沱茶总黄酮得率的影响．结果表明，以乙醇浓度=70％、提取时间30mi

2、n，料液比(g／mL)1：30为超声法最佳提取工艺，提取总黄酮得率为5．978mg／g，平均回收率为99．83％，RSD=0．96％(／7,=3)，旨在为进一步综合开发利用云南沱茶提供参考依据．关键词：总黄酮；沱茶；超声提取；比色法中图分类号：R284．2文献标识码：A文章编号：1673—1670(2015)02—0069—040引言1材料与仪器云南沱茶是具有悠久历史的高级紧压茶，由于1．1材料传统的原料配制与加工工艺技术形成了特有的色、1．1．1实验样品香、味风格，受到广大茶叶消费者的欢迎．云南沱购自于云南下关沱茶集团股份有限公司(批茶的医疗保健作用非常广泛，除具有兴

3、奋作用号：20130516)．外，还具有利尿、强心解痉、减肥、抑制动脉硬化、1．1．2试剂及药品抗菌抑菌、抑制癌细胞和抗衰老作用_l-3]．因此，芦丁对照品(批号：100080—201308)由中国在法国、西班牙、日本、香港等20多个国家和地药品生物制品鉴定所提供；无水乙醇、石油醚区有“减肥茶”“窈窕茶”“美容茶”“益寿茶”之美(60～90℃)、亚硝酸钠、硝酸铝、三氯化铝、三氯化称．铁、盐酸、镁粉、浓氨水等化学试剂为分析纯，购于生物总黄酮是指黄酮类化合物，是一大类天北京鼎国昌盛生物技术公司．然产物，广泛存在于植物界，是许多中草药的有1．2仪器设备效成分．在自然界中最常见

4、的是黄酮和黄酮醇，微量移液器(德国Eppendorf公司)；UV9100其他包括双氢黄(醇)、异黄酮、双黄酮、黄烷醇、紫外一可见分光光度计(北京瑞利分析仪器公查尔酮、橙酮、花色苷及新黄酮类等HJ．黄酮类化司)；BT一224S型电子分析天平(德国Sartofius公合物具有众多的生理功能和药用价值，然而迄今司)；KQ一205B型超声波清洗器(广州鸿富化工有关对云南沱茶中黄酮类化合物提取工艺和含有限公司)；Fw177型中草药粉碎机(天津泰斯特量测定的研究却未见报道．笔者采用单因素实验仪器有限公司)；数显恒温水浴锅(江苏金坛市金分析法对沱茶总黄酮的提取工艺进行研究，并测城国胜

5、实验仪器厂)；DZF一150小型真空衡温干定沱茶中总黄酮化合物的含量，旨在为进一步开燥箱(郑州长城科工贸有限公司)；SH2一D(III)循发利用沱茶提供参考．环水式真空泵(上海子期实验设备有限公司)；收稿日期：2014—08—30基金项目：云南省教育厅科学研究重点项目(2014Z126)；大理学院博士科研启动基金(BSKY2012018)；大理学院应用开发研究项目(201406)；云南省大学生创新创业计划(201408)作者简介：熊伟(1982一)，男，湖南省株洲市人，博士，大理学院基础医学院副教授，硕士生导师，主要研究方向：植物多糖生物活性．·7O·平顶山学院学报20

6、15焦MAS—II常压微波辅助合成／萃取反应仪(上海新盐酸一镁粉反应：精确吸取1．0mL提取液于仪器微波化学科技有限公司)；医用离心机(北京玻璃试管中，加入适量镁粉，充分摇匀后再加入浓医用离心机厂)．盐酸5—8滴，观察其颜色的变化．2．4回收率的测定方法2实验方法精确称取沱茶6份，每份1．000g，分别加入芦2．1芦丁对照品标准曲线的绘制丁对照品5。0mg，按2．2步骤操作，得到加入芦丁用电子天平准确称取芦丁对照品20．56mg，置标准液的样品的吸光度值，根据公式计算回收于100mL的容量瓶中，加入=70％乙醇至刻度，率：回收率=样品加芦丁标样测得总黄酮含即得芦丁对照品

7、溶液．用微量移液器精密吸取1．0、量一样品中总黄酮含量／芦丁的加入量×100％．2．0、3．0、4．0和5．0mL对照品溶液置于10mL比色3实验结果管中，各加入=70％乙醇定容至5mL，加P=5％亚硝酸钠溶液0．4mL，摇匀放置6rain，再加P=10％3．1黄酮类化合物的定性鉴定硝酸铝溶液0．4mL，摇匀，再放置6min，加P=4％黄酮类化合物经三氯化铁反应在可见光下呈氢氧化钠溶液4mL，摇匀放置15min．相同方法配紫色；三氯化铝反应呈灰蓝色；氨显色反应在紫外制空白对照，在506tim波长处测定吸光度值A为纵光下呈明显的墨绿色荧光斑