激活视网膜水平细胞NMDA受体对GABA转运体的抑制.pdf

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1、第16卷第6期重庆科技学院学报(自然科学版)2014年l2月激活视网膜水平细胞NMDA受体对GABA转运体的抑制姜晓东周桂凤汪耀珠(湖南师范大学医学院，长沙410013)摘要：目的：在视网膜水平细胞上研究激活NMDA受体对GABA转运体的调节作用。方法：采用膜片钳全细胞记录，分析水平细胞NMDA受体在激活前后的GABA转运体电流变化，并分析ca“在其中的作用。结果：当灌流0．1mmol／L的NMDA30s后，1mmol／LGABA所引发的GABA转运体电流下降到了对照水平的(78．01±3．10)％(n=5)；当细胞外Ringer’S液的

2、ca被去除后，NMDA的抑制效应消失；当胞内ca库的ca“释放和重吸收被阻断，或者胞内ca。被BAPTA缓冲后，NMDA的抑制效应减弱。结论：激活视网膜水平细胞的NMDA受体会抑制GA-BA转运体电流，细胞内ca“参与调节过程。关键词：视网膜；NMDA受体；GABA转运体；Ca“中图分类号：Q436文献标识码：A文章编号：1673—1980(2014)06—0160—05水平细胞是视网膜外网状层的中间神经元，是15～20cm)视网膜酶解方法得到。。。取视网膜置光感受器细胞的突触后神经元。水平细胞反馈调节于含酶Hank’S液(20U／mL木

3、瓜蛋白酶，1g／L半胱光感受器细胞(视锥细胞和视杆细胞)的神经递质氨酸)中，在室温静置20min后，再用Hank’S液反谷氨酸的释放，并参与下级神经元包括双极细胞和复冲洗，中止消化过程，保存于4℃条件下。在膜片神经节细胞光感受野的形成。一氨基丁酸(GA．钳记录前，取视网膜置于无镁Ringer’S液内剪碎，BA)是亮度型水平细胞的神经递质，水平细胞上的并用口径由大至小的不同滴管，反复轻柔吹打，至溶GABA转运体负责GABA的释放和重吸收。液浑浊后，静置3min，去上清液即可。亮度型水平N一甲基一D一天冬氨酸(NMDA)受体，作为谷细胞可以根

4、据形态去分辨。氨酸受体的重要亚型，广泛分布于中枢神经系统，参1．2全细胞记录和给药与神经元的兴奋性活动过程。NMDA受体对ca¨选用水平拉制仪(P87，SutterInstrumentInc．，通透，进而通过下游信号通路对多种离子通道和受USA)加热拉制芯硼硅酸盐玻璃胚(SutterInstrument体有调节作用J。视网膜水平细胞上的谷氨酸受体Inc．，USA)制备电极，电极插入水中，电阻控制在中，研究较多的是AMPA亚型受体；NMDA受体发现5—8Mlq。电极内灌注电极内液，与膜片钳放大器较晚，其功能尚不明确。水平细胞上AMPA受体对

5、(Axopatch200B，AxonInstrumentInc．，USA)相连，GABA转运体有调节作用，激活NMDA受体是否可并安装在微动操作仪(MCIO00e，SDInstrumentInc．，以调节GABA转运体还有待研究J。USA)上。参考电极采用Ag／AgC1电极，并用argar／因此，本文在分离的鲫鱼视网膜水平细胞上，利NaC1盐桥与细胞培养皿溶液相联。显微镜下移动电用膜片钳全细胞记录，分析激活NMDA受体对GA．极与细胞形成Gn封接后，再吸破胞膜形成全细胞记BA转运体电流的影响，研究Ca及胞内Ca库在录模式。调整补偿快速电容

6、、细胞电容、串联阻抗，并其中的作用。启动低通滤波后，设定钳制电压一60mV，开始全细胞记录。选用Clampfit9．2(AxonInstrumentInc．，1材料与方法USA)进行分析，数据采用均值±标准误差表示。1．1细胞分离1．3溶液水平细胞用成年鲫鱼(Carassiusauratus，身长Hank’S液包括：NaC1120．0mmol／L，KC13．0收稿日期：2014—09—05基金项目：湖南省教育厅资助科研项目(12B074)；湖南省卫生厅资助科研项目(B2012—062)作者简介：姜晓东(1977一)，男，辽宁人，博士，讲师

7、，研究方向为毒理学。·160·姜晓东，等：激活视网膜水平细胞NMDA受体对GABA转运体的抑制∞害宝石∞f，∞一霉吕0Z∞∞∞BA加转运∞体电流下降到对照水平的(91．28-4-图3给出了NMDA浓度与GABA转运体电流的关系曲线。6个剂量组(每组5个细胞)，分别为1，2．46)％(P<0．05，pairedt—test)，此时GABA转l0，30，100，1000，3000i~mol／L的NMDA，把GABA转运体被抑制的程度比ca。库正常情况时要低(P<运体电流抑制到对照组水平的(99．56±1．10)％，0．05，unpairedt

8、—test)。(97．06±2．30)％，(85．36±3．00)％，(78．07±P11)【一(Ca2free)3．10)％，(66．30±1．80)％，(65．11±1．67)％。调节NM