嘌呤受体P2X7激活谷氨酸受体NMDA引起视网膜神经节细胞凋亡.doc

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1、嘌呤受体P2X7激活谷氨酸受体NMDA引起视网膜神经节细胞凋亡作者：张秀兰张梅胡慧玲ClaireH.Mitchell葛坚【摘要】【目的】研究嘌呤受体P2X7和谷氨酸受体NMDA激活诱导大鼠视网膜神经节细胞（RGC）凋亡的相互作用机制。【方法】①对新生Long-Evan大鼠进行上丘注射荧光标记物Aminostilbamidine标记RGC，NMDA受体通道拮抗剂MK-801、APV和Memantine分别与P2X7受体激动剂BzATP共培养，检测它们对体外培养RGC存活率的影响；②未经Aminostilbamidine标记

2、的新生大鼠RGC，以10μmol/L钙离子（Ca2+）荧光染料Fura-2标记后，利用Ca2+影像测定仪分别测定BzATP及三种NMDA拮抗剂对RGC胞内Ca2+浓度的影响。【结果】（1）三种NMDA拮抗剂均分别不同程度阻断BzATP引起的RGC凋亡。BzATP在50μmol/L浓度下，约杀死（36%±2%）的RGC，而MK-801（10μmol/L）、APV（100μmol/L）和Memantine（100μmol/L）则均可明显减轻BzATP对RGC的毒性作用，使RGC存活率分别提高至（96%±4%，P<0.0

3、01）、（80%±5%，P=0.010）和（76%±9%，P=0.144）。（2）BzATP可引起RGC胞内Ca2+持续升高，在50μmol/L浓度下可使胞内Ca2+升高至（1183±109）nmol/L。而MK-801（10μmol/L）、APV（300μmol/L）和Memantine（30μmol/L）则均可显著降低BzATP介导的Ca2+升高幅度，分别为（76%±7%，P=0.003）、（51%±17%，P=0.033）和（55%±16%，P=0.025）。【结论】NMDA受体拮抗剂可阻断嘌呤受体P2X7激活诱导

4、的RGC凋亡。P2X7受体和NMDA受体通道激活可能共同介导着兴奋性神经毒作用且P2X7在NMDA受体的上一环节先起作用。【关键词】视网膜神经节细胞；P2X7受体；NMDAAbstract:【Objective】TodemonstrateifP2X7receptorandN-methyl-D-aspartate(NMDA)receptorlinktoinitiateretinalganglioncells(RGC)death.【Methods】(1)Long-Evanneonatalratswerebacklabeled

5、withAminostilbamidinetoidentifyRGC.RGCcellviabilitywasthenexaminedusingP2X7receptoragonistBzATPandNMDAreceptorantagonistsMK-801,APVandMemantine.(2)RGCweredissociatedfromtheretinasofunlabeledneonatalratsandwereloadedwithFura-2,anintracellularcalciumindicator.BzATP

6、andthreeNMDAreceptorantagonistswereappliedtoRGCtoexaminetheireffectsonintracellularCa2+levelsusingCa2+imagingsystem.【Results】(1)BzATP(50μmol/L)couldkillabout(36%±2%)oftheRGC.CelldeathwaspreventedbyMK-801(10μmol/L),APV(100μmol/L)andMemantine(100μmol/L)withaincreas

7、ingthecellviabilityof(96%±4%)(P<0.001),(80%±5%,P=0.010)and(76%±9%,P=0.144),respectively.(2)BzATP(50μmol/L)ledtoalarge,sustainedincreasesofintracellular8Ca2+(1183±109)nmol/L.CalciuminfluxtriggeredbyBzATPwasattenuatedbypre-andco-incubationofMK-801(10μmol/L),APV(

8、300μmol/L)andMemantine(30μmol/L)with(76%±7%,P=0.003),(51%±17%,P=0.033)and(55%±16%,P=0.025),respectively.【Conclusions】StimulationofP2X7receptorleadsRGCtodeathma