鼻咽癌肿瘤干细胞高表达SOD2可对抗顺铂的杀伤作用.pdf

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1、天津医药2015年6月第43卷第6期577细胞与分子生物学鼻咽癌肿瘤干细胞高表达SOD2可对抗顺铂的杀伤作用林碧华，陈婧，郭春连，余海波，张鑫，周克元摘要：目的探讨鼻咽癌(NPC)肿瘤干细胞对抗顺铂诱导氧化应激损伤的机制。方法利用CCK一8法测定顺铂对NPC细胞CNE一2与NPC肿瘤干细胞CNE一2s的半数抑制浓度。观察不同浓度f0．1、0．5、1．0p~mol·L-I)顺铂作用后，细胞内活性氧(ROS)、总谷胱甘肽(GSH)的含量及总超氧化物歧化酶(sod)的活性改变。实时定量RT—PCR测定1p~mol·L顺

2、铂作用于2组细胞48h后，谷胱甘肽合成酶(GSS)、一谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚基(GCLC)、一谷氨酰半胱氨酸合成酶调节亚基(GCLM)、SOD1和SOD2mRNA的表达情况，免疫印迹法检测SOD2蛋白的表达情况。利用小干扰RNA技术沉默SOD2，并与1p~mol·L顺铂共处理2组细胞，用台盼蓝染色观察细胞的存活情况。结果顺铂对CNE一2S的半数抑制浓度显著高于CNE一2(txmol·L～：9．8+1．1vs2．4~0．6，P<0．05)。在不同浓度的顺铂处理后，2组细胞内ROS水平升高，但CNE一2S在处理前

3、后的ROS水平均低于CNE一2(P<0．05)。1p~mol·L顺铂刺激后，CNE一2S与CNE一2细胞中GSH含量均上升，但2组细胞间无明显差异(P>0．05)；2组细胞中SOD活性均上升，且CNE一2S显著高于CNE一2(P<0．05)。顺铂处理前后，2组细胞的GSS、GCLC、GCLM和SOD1的mRNA水平无明显差异，但CNE一2S中SOD2的mRNA及蛋白表达水平高于CNE一2(P<0．05)。沉默SOD2与顺铂共处理2组细胞，能有效抑制其存活率。结论NPC肿瘤干细胞CNE一2S高表达SOD2后，抗氧化

4、应激能力增强，从而导致对顺铂的耐药。关键词：鼻咽癌；肿瘤干细胞；顺铂；耐药；氧化应激；谷胱甘肽；超氧化物歧化酶；RNA干扰中图分类号：R739．6文献标志码：ADOh10．11958／j．issn．0253—9896．2015．06．001NasopharyngealcarcinomastemcellsdevelopresistantagainstCisplatinthroughup—-regulatingS0DLINBihua，CHENJing，GUOChunlian，YUHaibo，ZHANGXin，ZHOU

5、KeyuanDepartmentofBiochemistryandMolecularBiologyGuangdongMedicalCollege，Dongguan,Guangdong523808,Chi—na；2DepartmentofPharmacy,DongguanPeople"sHospital；3DepartmentofPharmacology,GuangdongMedicalCol—lege，Dongguan；4CentreforTenderandBidding，GuangdongMedicalColl

6、ege；5KeyLaboratoryforMedicalMolecularDiagnosticsofGuangdongProvinceCorrespondingAuthorEmail：kyzOO9@126．comAbstract：0bjectiveToinvestigatethewaythatnasopharyngealcarcinoma(NPC)andNPCstemcellsdevelopsresistancetocisplatinthroughanti—reactiveoxygenspeciesmechani

7、sm．MethodsUsingCCK一8cellcountingkit，wemeasuredthehalfinhibitoryconcentrationofcisplatinagainstNPCcells”CNE一2”andNPCstemcells”CNE一2S”．andcomparedtheirresistantindex，WeexaminedthedifferencesinthereactiveoxygenspeciesfROs)levels，totalglutathi—one(GSH)levels，andt

8、otalsuperoxidedismutase(SOD)levelsbetweenCNE一2andCNE一2Satdifferentconcentrationsofcisplatinadministration(0．1,0．5and1．0Ixmol·L)．Usingq-PCR，wedeterminedthemRNAexpressionlevelofGSS，GCLC，GCL