专题3植物的组织培养技术.doc

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1、专题3植物组织培养技术一.植物组织培养的优点1.实现优良品种的快速繁殖，保持遗传性状的一致——菊花茎的组织培养：体细胞，无性繁殖，保持与后代的遗传性状一致，所以形成的植株可能为纯合子，可能为杂合子。月季的花药培养：生殖细胞，有性繁殖。采用花药培养的方法，使花粉粒发育为单倍体植株，再经过人工诱导使染色体数目加倍，重新恢复到正常植株的染色体数目——保证基因纯合，同时能够缩短育种年限。2.可以培育出大量不含病毒的幼苗，提高作物的产量——选材：选择根尖或茎尖，这些部位病毒含量较少、甚至不含病毒。3.实现花卉的连续生

2、产，不受开花季节的限制。二．菊花的组织培养和月季的花药培养的实验流程菊花的组织培养月季的花药培养备注产生植物的途径植物组织——愈伤组织——长处丛芽——生根——移栽成活花药中的花粉——愈伤组织——丛芽——生根——移栽花药中的花粉——胚状体——丛芽——生根——移栽（胚状体与愈伤组织在结构上的主要区别在于愈伤组织的细胞排列疏松、无规则，是一种高度液泡化的薄壁细胞，胚状体与正常受精卵发育形成的胚有类似的结构，即具有胚根、胚芽和胚轴）胚状体发育过程与合子胚（受精卵）类似，包括胚芽、胚根、胚轴等结构完整。包括体细胞胚和

3、花粉胚，两者间的区别表现在前者的染色体数目为后者的两倍。选材未开化植株的茎上部新萌生的侧枝完全未开放的花蕾——单核期，细胞核由中央移向细胞一侧的时期（镜检：醋酸洋红）生长旺盛的部位生理状态好——脱分化和再分化相对较为容易消毒外植体（花蕾）：70%酒精——无菌水——0.1%氯化汞——无菌水注意无菌水接种接种前：70%酒精擦拭工作台、点燃酒精灯接种中：所有操作在酒精灯火焰旁进行左右持瓶，使瓶口旋转通过火焰；右手用镊子夹取菊花茎段，插入培养基中。插入时，注意方向，不要倒插。每瓶接种6-8块外植体。接种后：将封口膜

4、重新扎好。消毒后的花蕾要在无菌条件下除去萼片和花瓣，并立即将花药接种到培养基上。（在剥离花药时，要尽量不损伤花药（否则接种后容易从受伤部位产生愈伤组织），同时还要彻底除去花丝，因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成）无菌技术培养接种后的锥形瓶最后放在无菌箱中培养，培养期间应定期消毒。培养温度控制在18~22℃，并且每日用日光灯光照12h。每瓶接种花药7-10个，培养温度控制在25℃左右，不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。2在花药培养过程中，特别是通过愈伤组织形成的花粉植株，染色体组的数目常常会

5、发生变化。因此还需要对培养出来的植株做进一步的鉴定（醋酸洋红法）和筛选。在培养过程中，根据发育的程度，应定期更换培养基（一方面是代谢，另一方面是激素种类和含量比的差异）移栽在移栽生根的试管苗之前，应先打开培养瓶的封口膜，让试管苗在培养间生长几日。然后用流水清洗根部的培养基，注意不能损伤根系。1.将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境下生活一段时间，等幼苗长状后在移栽到土壤中。2.无土栽培：将培养基基质提前消毒，向培养基基质中喷洒5%的高锰酸钾，并用塑料薄膜覆盖，掀开膜后24h才能移栽，先温室，后大田。壮苗栽

6、培将幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗生长情况，适时浇水，施肥，直至开花。影响因素外因：1.培养基的组成：无机盐（大量元素、微量元素）、有机物（蔗糖：提供碳源、维持渗透压，硝酸铵：既有硝态氮也有铵态氮）2调节剂：生长素和细胞分裂。比值大于1，有利于根的分化、抑制芽的形成比值等于1，形成愈伤组织比值小于1，有利于芽的分化、抑制根的形成3环境条件（温度、pH、光照）内因：材料的选择2