低氧诱导因子1α基因三点突变体体外转染骨髓间充质干细胞.pdf

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1、中国组织工程研究笫18眷第79期2014—05—07出版ChineseJournalof~ssueEngineeringResearchMay7J2014Vo1．18，No．19WWW．CRTER．org低氧诱导因子1a基因三点突变体体外转染骨髓间充质干细胞惠春影’，肖洪艳，何欣玲’，王维。(辽宁医学院附属第一医院，’心脑外科，介入科，3康复医学科，辽宁省锦州市121001)文章亮点：1文章创新性地将低氧诱导因子1a基因的3个相关降解位点均进行了突变，这样不仅使得低氧诱导因子1a惠春影，女，1983年生

2、，在常氧条件下可以表达，表达效率也相应增加。同时将突变后的低氧诱导因子1a基因应用于脊髓损伤治疗目吉林省榆树市人，汉族，2007年吉林大学毕业，主前国内尚未见报道。要从事脊髓损伤的基因治2不足之处在于仅观察了低氧诱导因子1a基因在体外对骨髓间充质干细胞的作用，并没有进行动物实验，后疗。期将进行后续实验完善该课题。关键词：通讯作者：王维，硕士，于细跑骨髓于细胞骨髓阃充暖于继匏脊髓损伤：低氧诱导园子la：基因突变盘管内皮细跑生长子副教授，辽宁医学院附属第一医院康复医学科，辽主题词：宁省锦州市121001于细

3、瞧：阃硬于细胞：脊髓损伤；基因：血管内受生长因子类基金资助：doi：10396g／j．Jssn．2095-4344辽宁雀科学技术厅社会发展处资助项H(2012408002)20149001【h婶：／www．crtenorg】摘要中图分类号：R394．2背景：脊髓损伤后只有尽早地在损伤局部构建有效的血管网络，才能为各种细胞的分化提供营养支持和代谢文献标识码：A保证，加速损伤局部的愈合。文章编号：2095-4344目的：构建三点突变的低氧诱导因子1a重组腺病毒表达载体，将其转染大鼠骨髓间充质干细胞后检测常氧

4、条(2014)19-02953—08件下对脊髓损伤促血管新生的作用。稿件接受：2014-02．26方法：利用PCR方法定点突变人低氧诱导因子1a编码区的第402，564和803位氨基酸，将突变后低氧诱导因子1a基因重组入腺病毒pAdEasy．1系统，包装病毒并测定滴度，同理包装未突变组和空病毒组；以3种病毒液连同空白组共分4组进行后续实验。将病毒液转染入大鼠骨髓间充质干细胞内，通过示踪因子增强型绿色荧光蛋白观察病毒转染效率，通过RT．PCR方法检测4组细胞中低氧诱导因子1a基因mRNA表达情况；进一步通

5、过Westernblot方法检测4组细胞中低氧诱导因子1a基因及其下游成血管基因血管内皮细胞生长因子的蛋白表达情况。结果与结论：编码区第402，564利803位氨基酸均定点突变为丙氨酸；3种腺病毒重组体构建成功并包装鉴定完毕。含突变基因病毒液组、含未突变基因病毒液组低氧诱导因子1ElmRNA表达量明显高于空病毒液组、空白组(P<0．o5)。含突变基因病毒液组细胞低氧诱导因子1a蛋白及血管内皮细胞生长因子蛋白表达量显著高于其他3组(P<0．o5)。提示j点突变后低氧诱导因子1a基因不仅能够在常氧条件下大量

6、且高效表达，还同时能够促进其下游血管内皮细胞生长因子基因的高效表达，为脊髓损伤疾病的血管新生治疗提供了一种新的治疗方向。惠春彰肖洪艳，饲钦玲．王维．低氧诱导因子1El基因三点突变体体外转染骨髓阃充质于细胞中国组织I程研究．2014．18(19)：2953-2960．Invitrotransfectionoftriple·pointmutantsofhypoxia-induciblefactor1alphaintobonemarrowmesenchymalstemcellsHuiChun．ying’Xia

7、oHong．yan，HeXin．1ing’WangWei。f’DepartmentofCardiocerebralSurgery，，,DepartmentofInterventionMedicine，。DepartmentofRehabilitation，FirstAfiliatedHospitalofLiaoningHuiChun-ying，DepartmentofMedicalUniversity,Jinzhou121001，LiaoningProvince，China)Cardiocarebral

8、Surgery,FirstAffiliatedHospitalofLiaoningAbstractMedicalUniversity，JinzhouBACKGROUND：ThejncidenceofspineJCOrdinjuryjSincreasingyearbyyearjnChJnaSOthattheconstructionof121001．LiaoningProvince．efectivevascularnetworkinIocaIi