高效液相色谱蒸发光散射法测定

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1、第38卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告第4期2010年4月ChineseJournalofAnalyticalChemistry522～526DOI:10.3724/SP.J.1096.2010.00522高效液相色谱-蒸发光散射法测定牛黄中多种有效成分含量及其质量相关性研究1，2*11，3421刘苇金城孔维军王海涛龚千锋肖小河12(解放军中药研究所解放军第302医院，北京100039)(江西中医学院药学院，南昌330004)34(成都中医药大学药学院，成都610075)(解放军第306医院，北京100101)摘要建立高效液相色谱-蒸发光散射法(

2、HPLC-ELSD)同时快速测定牛黄中7种组分的含量的方法。色谱柱为UltimateAQ-C18柱，流动相为乙腈-0.2%甲酸水溶液，梯度洗脱，流速1mL/min;蒸发光散射检测器参数:漂移管温度100℃，载气(N2)流速1.9L/min。在选定色谱条件下，胆固醇、各种胆汁酸及其钠盐峰形良好且能达到很好地分离。各组分色谱峰峰面积的对数与浓度的对数呈良好线形关系(r>0.9972);标准加入回收率为98.8%～112.7%;7种组分的最低检出限为0.001～0.007g/L。本方法可简便、快速地同时检测不同牛黄样品中7种组分的含量并可表征不同牛黄样品的质量，从

3、而为该名贵药材的质量控制提供更全面的依据和参考。关键词牛黄;高效液相色谱-蒸发光散射检测;多组分;同时测定1引言［1］牛黄为牛科动物牛BostaurusdomesticusGmelin的干燥胆结石，其天然资源奇缺且价值昂贵，而［2，3］代用品(培植牛黄、体外培育牛黄与人工牛黄)的价格和质量差异悬殊，必然导致疗效的巨大差异。［4］为此，国家SFDA明确限定了天然牛黄及其代用品在调剂和制剂入药方面的使用范围。针对牛黄品种、质量的复杂性和多样性，有必要对这些样品建立实用和有效的质控方法。《中国药典》(2005版)规定，以薄层色谱法定性检验天然牛黄中胆酸、去氧胆酸和

4、胆红素及人工牛黄中胆酸、猪去氧胆酸、牛磺酸等，定量测定的天然牛黄中胆酸不得少于4.0%，紫外-可见分光光度法测得天然牛黄中的胆红素不得少于35.0%及人工牛黄中的含胆酸不得少于13.0%，胆红素不得少于［1］0.63%。文献［5，6］报道，以其中一种或几种成分为指标来测定牛黄质量，而猪去氧胆酸作为牛黄中重要成分之一，却少见报道。因胆酸类成分无紫外吸收或者紫外吸收很弱，常用检测器很难同时反映所［7］有组分的信息，更难准确监测和控制其主要的药效组分。蒸发光散射检测器(Evaporativelightscatter-ingdetector，ELSD)是一种通用型质

5、量检测器，可分析不含共轭结构或无紫外吸收的物质，并能在多溶［8～15］剂梯度的情况下获得稳定的基线和较低的噪音，也可在较快的分离速度下获得理想的分辨率。本实验采用HPLC-ELSD同时测定牛黄中7种组分的含量，并以此7种组分含量为指标，对不同样品的质量进行比较和预测分析，为牛黄的质量控制提供参考，亦为名贵中药材化学有效成分的同时测定及生物评价和质量控制提供了一种模式。2实验部分2.1仪器与材料1100Series高效液相色谱仪，配自动进样器及二极管阵列检测器(Agilent公司);色谱柱为UltimateAQ-C18色谱柱(25cm×4.6mm，5μm);A

6、lltech-2000型ELSD检测器(Alltech公司)。乙腈为色谱纯(Fisher公司);甲酸及其它试剂均为分析纯(北京化学分析公司)。牛黄胆酸钠、胆酸、熊去氧胆酸、猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸、去氧胆酸和胆固醇均购于中国药品生物制2009-09-17收稿;2009-12-07接受本文系科技重大专项“重大新药创新”(No.2009ZXJ0904-057)资助*E-mail:pijincheng@126.com第4期刘苇等:高效液相色谱-蒸发光散射法测定牛黄中多种有效成分含量及其质量相关性研究523品检定所。天然牛黄:A(北京同仁堂药店)，B(中国药材公司)，

7、C和F(中国药品生物制品检定所);人工牛黄:D(北京同仁堂药店)，E(重庆格瑞林药业有限公司)，以上药材均经解放军302医院肖小河研究员鉴定。2.2色谱条件流动相:A为0.2%甲酸水溶液，B为乙腈;梯度洗脱程序:0min，58%A，15.00min，45%A，25.00min，10%A。流速:1mL/min;进样量:7μL;柱温:30℃;ELSD检测器参数:漂移管温度:100℃;载气(N2)流速:1.9L/min;不分流模式(Impactoff)。2.3样品处理分别精密称量A、B、D、E样品(0.1±0.005)g，C样品0.0105g，F样品0.0434g

8、于25mL容量瓶中，加入10mL甲醇，超声30min