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《稳定表达绵羊肺腺瘤病毒受体Hyal-2蛋白细胞系的建立-论文.pdf》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在应用文档-天天文库。
1、第36卷第3期中国预防兽医学报Vo1.36.NO.32014年3月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineMar.2O14doi:10.3969~.issn.1008-0589.2014.03.05稳定表达绵羊肺腺瘤病毒受体Hyal一2蛋白细胞系的建立刘畅,-,李磊,-,于立新,一,么宏强,-,周建华,马学恩,(1.内蒙古农业大学兽医学院,内蒙古呼和浩特010018;2.农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室,内蒙古呼和浩特010018;3.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,黑龙江哈尔滨150001)
2、摘要:为构建稳定表达绵羊肺腺瘤病毒(JSRV)受体透明质酸酶.2(Hya1.2)的NIH3T3细胞系,本研究采用RT.PCR方法从绵羊瘤胃组织总RNA中扩增Hya1.2的cDNA,并引入标签多肽HA序列和限制性内切酶位点,将其克隆至真核表达质粒pcDNA3.1(+)中,构建重组质粒pcDNA.Hyal2.HA。将该重组质粒转染NIH3T3细胞,并利用G418筛选、纯化,获得了稳定表达JSRV受体蛋白Hya1.2的NIH3T3细胞系。qPCR、间接免疫荧光及westernblot检测结果表明,该细胞系在传代至15代后,Hyal2一HA在NIH3T
3、3细胞中仍然能够稳定表达,并且主要分布于细胞膜上。JSRV囊膜蛋白诱导细胞转化试验显示,该蛋白的瞬时表达可以导致NIH3T3细胞出现转化聚积灶,但失去了对稳定表达绵羊Hya1.2蛋白NIH3T3细胞系的诱导转化作用,其作用机制尚待阐明。该细胞系的建立为进一步研究JSRV与其受体的相互作用致瘤机制奠定了基础。关键词:绵羊肺腺瘤病毒;透明质酸酶.2;真核表达;NIH3T3细胞系中图分类号:$852.65文献标识码:A文章编号:1008—0589(2014)03.0187.05Developmentofacelllinestablyexpressin
4、gJaagsiekteretrovirusreceptorHyal一2proteinLIUChang。,,LILei,,YULi—xin,,YAOHong-qiang,,ZHOUJian-hua,MAXue-en,’(1.CollegeofVeterinaryScience,InnerMongoliaAgriculturalUniversity,Huhhot010018,China;2.KeyLaboratoryofClinicalDiagnosisandTreatmentTechnologyinAnimalDisease,Ministryof
5、Agriculture,Huhhot010018,China;3.HarbinVeterinaryResearchInstitute,ChineseAcademyofAgriculturalSciences,Harbin150001,China)Abstract:TostudytherelationshipbetweenJaagsiekteretrovirus(JSRV)andreceptorofJSRV,aNⅢ3T3celllineexpressingsheepreceptorprotein(Hyal一2)ofJSRVwasestablish
6、ed.TheHyal一2cDNAwasamplifiedwithallHAtagbyRT—PCRandclonedintotheeukaryotieexpressingvectorpcDNA3.1(+).TheresultingrecombinantplasmidwastransfectedintoNm3T3cells.AcelllinestablyexpressingHyal2一HA,namedasNm3T3-Hyal2-HA,wasscreenedandcolony-purifiedunderthedrugselectionofG418.T
7、heexpressionofHyal2一HAwasconfirmedbyqPCR,indirectimmunofluorescenceassayandwesternblot.ResultsindicatedthattherecombinantHyal2一HAwascorrectlyandefectivelyexpressedintheNm3T3-Hyal2-HAcelllineandwasmostlylocatedinthemembrane.ThetransientexpressionofJSRVenvelopeprotein(Env)in3T
8、3ceilsresultedinthemultipleformationoftransformedcellcoloniesbutfailedtoind
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