绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白(jsrv-env)对大鼠的致瘤性的研究

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1、分类号S852.3学校代码10129UDC11.220学号2009201058绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白(JSRV-Env)对大鼠的致瘤性的研究ThestudiesoftumorigenigcityofJSRV-Envinrats申请人：李靖学科门类：农学学科专业：基础兽医学研究方向：动物分子病理学指导教师：马学恩教授论文提交日期：二〇一二年六月摘要目的：为深入探讨绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白(JSRV-Env)的致瘤性作用，以及对动物机体各项生理指标和相关基因的影响。方法：将真核表达质粒pcDNA3.1-env用体内转染试剂经尾静脉转染到幼龄大鼠体内，在转染21天后采用RT-PCR

2、的方法及免疫组化法检测真核表达质粒pcDNA3.1-env在大鼠体内的表达；在转染6个月内对转染大鼠进行临床指标测定，每隔30d检测外周血中淋巴细胞及其亚群的动态变化以及淋巴细胞凋亡情况，同时进行血气分析和肿瘤标志物的检测；对大鼠肺脏组织K-ras基因、P53基因用SSCP的方法检测基因突变情况；通过制作病理切片观察组织学病理变化。结果：转染21d后真核表达质粒pcDNA3.1-env在大鼠肺脏组织存在表达。在转++染180d的期间内，外周血中CD4和CD8T淋巴细胞水平在整个过程未呈现出显著变化；凋亡细胞水平在整个过程中没有发生明显的凋亡程度变化；血气分析结果显示pCO2

3、、pO2、Hct、BE(ecf)等十六项指标在不同时期与对照组比较，不存在显著性差异。肿瘤标志物癌胚抗原（CEA）和甲胎蛋白（AFP）检测结果均在正常范围内,转染组与对照组比较没有发生显著变化。K-ras基因、P53基因没有发生突变情况。病理组织学观察没有发现特征性病理学变化。结论：本研究在大鼠体内检测到JSRV-env基因mRNA表达，同时可检测到Env基因的蛋白表达，证明已经成功的将JSRV–env基因转染进肺脏细胞胞浆内，而JSRV的Env糖蛋白除了最初在病毒侵入细胞过程中的作用外，它还具有类似病毒致癌蛋白的作用，能够直接刺激细胞转化，这为下一步的致瘤作用奠定了初步的

4、基础。本实验对转染JSRVpcDNA3.1-env真核表达质粒的大鼠分别进行血气分析检测，淋巴细胞亚群变化的检测，淋巴细胞凋亡情况的检测，肿瘤标志物的检测，相关基因突变的检测以及组织病理学检测，和对照组比较均未发现明显的变化，证实绵羊肺腺瘤病毒囊膜基因(JSRV-env)对大鼠尚未产生致瘤性作用。其主要原因可能是绵羊肺腺瘤病毒囊膜基因(JSRV-env)没有整合到大鼠的基因组中，从而没有达到致瘤的作用；也可能是动物种属差异、或者是作用时间不够长造成的后果。关键词：绵羊肺腺瘤病；免疫组化；基因突变；肿瘤标志物；流式细胞术Thestudiesoftumorigenigcityo

5、fJSRV-EnvinratsAbstractOBJECTIVE：ToexplorethetumorigenicroleofJSRV-Env,andtheaffactfortheanimal'sbodyofphysiologicalparametersandrelatedgene.METHODS：TheeukaryoticexpressionplasmidpcDNA3.1-envistransfectedintoyoungratswithvivotransfectionreagentthroughtailveininjectionmethod.After21days,usi

6、ngRT-PCRandimmunohistochemicalstainingmethodtodetecttheeukaryoticexpressionplasmidpcDNA3.1-envexpressioninrats.Afterthat,wedeterminatedtheclinicalindicatorsoftheratswhichwerebeentranstectedwithinsixmonths,anddetectedthedynamicchangesofflowcytometryinperipheralbloodlymphocytesubsetsandlymph

7、ocyteapoptosisevery30days.Atthesametime,weshouldconductthebloodgasanalysisanddetectionoftumormarkers,anddetectedthemutationsoftheorganizationofratlungK-rasgene,P53geneusedtheSSCPmethodtodetect.Alsoobservedthepathologicalchangesoftheorganizationsthroughtheprodu