呼吸道合胞病毒的采集、分离、鉴定和培养-论文.pdf

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1、广东医学2014年6月第35卷第11期GuangdongMedicalJournalJun．2014，Vo1．35，No．11·1659·呼吸道合胞病毒的采集、分离、鉴定和培养冰李红，钱立，乔建瓯‘上海交通大学附属胸科医院急诊科(上海200030)；上海交通大学附属第九人民医院呼吸内科(上海200011)【摘要】目的探讨从患者体内获得有毒力和生物活性的呼吸道合胞病毒(RSV)的方法。方法用咽拭子从患者咽部采集标本，离心后通过RT—PCR方法鉴定RSV，随后从RSV阳性标本中，以人喉癌上皮细胞(Hep一

2、2细胞)进一步分离和培养RSV，并观察细胞致病变效应，检测病毒滴度。结果从60例患者咽拭子标本中采集分离到6株RSV，阳性率为10％，且成功培养、传代，镜下观察RSV感染的细胞致病变效应明显，病毒滴度为106．33／100L。结论采用咽拭子、Hep一2细胞和RT—PCR方法能够成功采集、分离、初步鉴定并且培养获得有毒力和生物活性的RSV。【关键词】呼吸道合胞病毒；咽拭子；Hep一2细胞Thecollection，isolation，identificationandcultureofrespirato

3、rysyncyti~virus．L／Hong，QIANLi，QIAOJian一0．EmergencyDepartment，ShanghaiChestHospitalAfiliatedtoShanghaiJiaotongUniversity，Shanghai200030，ChianCorrespondingauthor：QIAOJian—ou．【Abstract】ObjectiveToobtainliverespiratorysyncytialvirus(RSV)frominfectedpatients

4、．MethodsRSVinpharyngealswabspecimenscollectedfrompatients，aftercentrifugation，wereidentifiedbyRT—PCR．RSVinpositivespecimenswerefurtherisolatedandculturedthroughHep一2cells．andthevirustitersdetected．ResultsSixRSVstrainsisolatedfrom60specimens，withtheposit

5、iverateof10％，weresuccessfullyculturedandpassaged．Viraltiterwas106．33／100txL．ConclusionRSVisacommonpathogenofacuterespiratoryinfectionsofinfants．Usingswabs，Hep一2cellsandRT—PCRmethods，virulentRSVsaresuccessfullycollected．isolated．andpreliminaryidentifieda

6、ndcultured．【Keywords】respiratorysyncytialvirus；pharyngealswabspecimens；Hep一2cells呼吸道合胞病毒(respiratorysyncytialvirus，RSV)1．3RT—PCR方法鉴定RSV是最常见的呼吸道病毒之一。RSV感染常见于儿童、1．3．1通过NCBI的GenBank调出RSV基因组分老人和免疫力下降人群如器官移植者等。在全世界别选择RSVN基因和RSVL基因设计引物如下：N基范围内，3岁及以上儿童RSV的感染或曾

7、经感染率大因引物上游：5一GTGTAATGGAACAGACGC一3，下于90％[23。严重的下呼吸道RSV感染是引起儿童和游：5一GACCTTAGATACGGcAAT一3；L基因引物上青少年哮喘的一个非常重要的原因。为更好地研究游：5一TCITcATCACCATAcTIⅥICTGTrA一3，下游：RSV引起哮喘的机制，必须首先获得病原体，即具有致5一GCCAAAAAATTGTITI1CCACAATA一3。病力的RSV病毒株，为此2012年l一12月我们从来上1．3．2病毒RNA提取在1．5mL的Epp

8、endorf管中海交通大学附属第九人民医院儿科就诊的3岁以下婴加入病毒提取液500txL，再加入TRIzolLS500L，混幼儿患者的咽拭子中尝试采集、分离、培养RSV并且匀，室温静置10min。加入氯仿200，用力振荡，室进行初步鉴定。温放置10min。离心4℃、13000r／min、15min，取上层1材料与方法液相移人另一管。加入等体积异丙醇，混匀液体，室温放置10min。离心15min，去上清液。沉淀以75％乙1．1标本采集入组条件：年龄≤3岁；